ग्लूकोज (चित्रा के साथ) का उपयोग करने के लिए उनकी क्षमता का पता लगाने के लिए बैक्टीरिया पर वोग्स-प्रॉस्क्यूएर प्रयोग

बैक्टीरिया पर वोगेस-प्रॉस्क्यूअर टेस्ट (वीपी टेस्ट) के बारे में जानने के लिए यह लेख पढ़ें, एसिटाइलमेथाइलकार्बिनॉल के उत्पादन के साथ ग्लूकोज का उपयोग करने की उनकी क्षमता का पता लगाने के लिए!

सिद्धांत:

कुछ बैक्टीरिया में ग्लूकोज का उपयोग करने और इसे एसिटिलमेथिलकार्बिनोल (एसीटोन) में बदलने की क्षमता होती है, जो एक तटस्थ उत्पाद है।

ये बैक्टीरिया शुरू में ग्लूकोज को पाइरुविक एसिड के रूप में चयापचय करते हैं, जो कि मेटाबॉलिक मध्यवर्ती एसिटिक एसिड से एसिटाइलमिथाइलकार्बिनोल (एसिटोइन) और C0 ₂ से 'ब्यूटाइलीन ग्लाइकॉल मार्ग' के माध्यम से चयापचय होता है।

एसिटाइलमिथाइलकारबिनॉल क्षारीय स्थिति (40 प्रतिशत केओएच) के तहत ए-नेफथोल की उपस्थिति में डायसेटाइल के लिए ऑक्सीकरण होता है। Diacetyl क्रिएटिन के गुआनिडाइन समूह (कल्चर माध्यम में प्रयुक्त पेप्टोन से) के साथ गुलाब गुलाबी रंग उत्पन्न करने के लिए प्रतिक्रिया करता है।

Voges-Proskauer परीक्षण (VP परीक्षण) में, टेस्ट बैक्टीरिया को ग्लूकोज युक्त शोरबा माध्यम में उगाया जाता है। यदि बैक्टीरिया में एसिटाइलमेथिलकार्बनोल (एसीटोन) के उत्पादन के साथ ग्लूकोज का उपयोग करने की क्षमता होती है, तो तटस्थ अंत उत्पाद के रूप में, शोरबा एक गुलाबी गुलाबी रंग का अधिग्रहण करता है, इसके अलावा एक नेफथोल समाधान 40% एचओएच होता है।

सामग्री की आवश्यकता:

टेस्ट ट्यूब, शंक्वाकार फ्लास्क, कॉटन प्लग, इनोक्युलेटिंग लूप, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लेमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, एमआर-वीपी शोरबा (या ग्लूकोज फॉस्फेट शोरबा), वीवीएस समाधान I (बैरेट के अभिकर्मक समाधान ए) और वीपी समाधान II (बैरिट के अभिकर्मक समाधान बी), पृथक कालोनियों या बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों।

प्रक्रिया:

1. MR-VP ब्रोथ मीडियम (मुख्य घटक के रूप में ग्लूकोज युक्त) या इसके रेडीमेड पाउडर को ब्रॉथ के 100 मिलीलीटर के लिए जरूरी तौला जाता है और इसे 250 मिली शंक्वाकार फ्लास्क में आसुत जल के 100 मिलीलीटर में भंग कर दिया जाता है। घूमता (चित्रा 7.5)। मिथाइल रेड टेस्ट के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला शोरबा भी यहां इस्तेमाल किया जा सकता है। आमतौर पर एक ही शोरबा का उपयोग एक ही समय में दोनों परीक्षणों (एमआर और वीपी) के लिए किया जाता है।

2. इसका पीएच एक पीएच पेपर या पीएच मीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है और यदि यह कम है तो 0.1N HCI का उपयोग कर 6.9 या समायोजित किया जाता है। कुप्पी को गर्म किया जाता है, यदि आवश्यक हो, तो सामग्री को पूरी तरह से भंग करने के लिए।

3. शोरबा को पांच परीक्षण ट्यूबों (लगभग 10 मिलीलीटर प्रत्येक), कपास-प्लग में बांटा गया है, शिल्प कागज के साथ कवर किया गया है और धागे या रबर बैंड के साथ बांधा गया है।

4. शोरबा ट्यूबों को आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस (15 साई दबाव) पर निष्फल किया जाता है।

5. शोरबा ट्यूबों को कमरे के तापमान तक ठंडा करने की अनुमति है।

6. परीक्षण बैक्टीरिया को असंगत रूप से टीका लगाया जाता है, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष में, बन्सेन लौ के ऊपर निष्फल लूप की मदद से शोरबा में। लूप को प्रत्येक इनोक्यूलेशन के बाद निष्फल किया जाता है।

7. इनक्यूबेटेड शोरबा ट्यूबों को एक इनक्यूबेटर में 48 से 72 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है।

8. वीपी समाधान I (α-naphthol युक्त) शोरबा ट्यूबों (0.2 मिलीलीटर प्रत्येक) में गिरा दिया जाता है और अच्छी तरह मिलाया जाता है।

9. VP समाधान II (KOH युक्त) शोरबा ट्यूबों (0.6 मिलीलीटर प्रत्येक) में गिराया जाता है, अच्छी तरह मिश्रित होता है और 30 मिनट से 2 घंटे तक खड़े होने की अनुमति दी जाती है।