मछलियों में युग्मकों का क्रायोप्रेज़र्वेशन
इस लेख में हम मछलियों में युग्मकों के क्रायोप्रेज़र्वेशन के बारे में चर्चा करेंगे।
क्रायोप्रेज़र्वेशन एक भंडारण तकनीक है जिसमें व्यावहारिक रूप से कोई समय सीमा नहीं होती है। इस तकनीक से मछली के युग्मकों के संरक्षण की कोशिश की गई है। शुक्राणुओं के क्रायोप्रेज़र्वेशन पशुपालन में एक अच्छी तरह से स्थापित प्रक्रिया है।
अब मवेशियों, घोड़ों, सुअर, भेड़ और मुर्गे के प्रजनन में कृमिनाशक शुक्राणुओं का सफलतापूर्वक उपयोग किया जाता है। यह ध्यान रखना दिलचस्प है कि इस तकनीक को मछली के शुक्राणुओं, ओवा और भ्रूण के संरक्षण में स्थानांतरित करने के लिए महान प्रयास किए गए हैं।
इस तकनीक से मछली प्रजनकों को निम्नलिखित तरीकों से मदद मिलेगी:
(1) नर और मादा के गैर-संयोग परिपक्वता की समस्या को दूर किया जा सकता है, अगर शुक्राणु या डिंब भंडारण में रखे जाते हैं।
(२) चयनात्मक प्रजनन का कार्यक्रम चलाया जा सकता है जो स्वदेशी स्टॉक को बेहतर बनाएगा और तीसरी दुनिया को उनकी स्वदेशी प्रजातियों को बनाने और बेहतर डंठल के विशेष उपभेदों का उत्पादन करने में मदद करेगा।
(3) युग्मकों के क्रायोप्रेज़र्वेशन की तकनीक स्वदेशी जर्मप्लाज्म के संरक्षण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाएगी क्योंकि कई देशी भारतीय मछलियाँ विदेशी मछलियों का मुकाबला नहीं कर सकती हैं। इस तकनीक के द्वारा खतरे की प्रजातियों के युग्मकों को पर्यावरणीय गड़बड़ी के कारण घटती आनुवंशिक परिवर्तनशीलता के खिलाफ बचाव के रूप में देखा जाता है।
(४) यह मोनो-सेक्स संस्कृति के उत्पादन में मदद कर सकता है।
(५) यदि युग्मकों को सफलतापूर्वक संरक्षित किया जा सकता है तो हम अपनी आवश्यकता के अनुसार पूरे वर्ष मछली विकसित कर सकते हैं और जनसंख्या की आनुवंशिक मौलिकता को बनाए रखने के लिए जीन बैंक स्थापित करने में मदद कर सकते हैं और जीवित रहने की सामान्य स्थिति में सुधार होने पर उन्हें पुन: परिचय के लिए उपलब्ध रख सकते हैं।
शुक्राणु, अंडे और भ्रूण cryopreserved हो सकता है, लेकिन अंडे और भ्रूण के संरक्षण के लिए मुश्किल है क्योंकि इन कोशिकाओं में पर्याप्त रूप से अवशोषित होने के लिए cryoprotectant की अनुपलब्धता के कारण शुक्राणुजोज़ा की तुलना में उनके बड़े आकार के कारण।
मछलियों में शुक्राणुजोज़ा का क्रायोप्रेज़र्वेशन आदमी में सफल है; प्रजातियाँ ये प्रजातियाँ हैं ओन्कोरहाइन्चस, सल्मो, साल्वीलिनस फोंटिनालिस, ह्युको ह्युको, थाइमलस थाइमलस, एसोक्स ल्यूसीस और साइप्रिनस कार्पियो, सेरोथोडोन गोसंबिकस; लबियो रोहिता, कैटला कैटला और सिरहिनस मृगला।
शुक्राणुजोज़ा के संरक्षण में निम्नलिखित चरणों का पालन किया जाना चाहिए:
(१) दुग्ध का संग्रह (वीर्य)।
(२) विस्तारक समाधान तैयार करना।
(3) क्रायोप्रोटेक्टेंट का चयन।
(४) जम जाना।
(५) निषेचन में सफलता।
दूध का संग्रह:
पहला कदम शुक्राणुओं को इकट्ठा करना है। आमतौर पर शुक्राणुओं को स्वस्थ मछलियों से स्ट्रिपिंग विधि द्वारा एकत्र किया जाता है। कैथेटर का उपयोग किया जा सकता है, जो स्ट्रिपिंग के लिए बेहतर विकल्प है। सर्वश्रेष्ठ विशेषता लक्षणों वाले पुरुष ब्रोकर्स को रिंगर्स समाधान के साथ चुना गया और धोया गया और जननांग पैपिला क्षेत्र सूख गया।
ब्रूडर को एनेस्थेटाइज़ किया जा सकता है या एनेस्थेटाइज़ नहीं किया जा सकता है। आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला एनेस्थीसिया फेनोएक्सीथेनॉल की 0.3 मिली / ली। कुमार (1989) के अनुसार, स्ट्रिपिंग से पहले suston 250 (ऑर्गन) का एक इंजेक्शन भारतीय कार्प्स में बेहतर परिणाम देता है। इस क्षेत्र के अधिकांश मजदूरों ने दुग्ध प्राप्त करने के लिए अनसैचुरेटेड मछलियों को अलग करने की सिफारिश की।
इस मिल्क को सीरिंज या हेमोलाइसिस ट्यूब में इकट्ठा किया जाता है और बाद में ग्लास ampules (सील्ड या अनसेल्ड), प्लास्टिक स्ट्रॉ और अक्सर प्लास्टिक बैग में संरक्षित किया जाता है। शुक्राणुओं के रंग, मात्रा, घनत्व, पीएच और गतिशीलता पर ध्यान दिया जाना चाहिए।
नमूना मूत्र और मल पदार्थ से मुक्त होना चाहिए। शुक्राणुओं में असामान्यताओं को नोटिस करने के लिए माइक्रोस्कोप के तहत नमूने की एक स्मीयर जांच की जानी है। यदि नमूना ठीक है, तो आगे की प्रक्रिया के लिए रखा जाए, अन्यथा नए ब्रूडर से ताजा नमूना लिया जा सकता है।
शुक्राणुजोज़ा के संग्रह और संरक्षण की अवधि के दौरान, निरंतर तापमान बनाए रखने के लिए सिरिंज / ampules / पुआल को तालाब के पानी में रखा जा सकता है। पौराणिक और बिलार्ड (1980) ने बर्फ को पिघलाने में हेमोलिसिस ट्यूब में शुक्राणुओं को एकत्र किया और फिर 4 ° C पर प्रशीतित सतह पर संग्रहित किया।
एक्सटेंडर की तैयारी और चयन, एक समाधान जिसमें मिल्ट एकत्र किया जाता है, क्रायोप्रेज़र्वेशन के लिए सबसे महत्वपूर्ण है। एक्सटेंडर शुक्राणु ऊर्जा की कमी को रोकता है और शुक्राणु को जिज्ञासु स्थिति में बनाए रखता है लेकिन जीवित है।
दो बुनियादी एक्सटेंडर हैं। उन्हें Mounibs माध्यम (M) और Menezo माध्यम (Me) कहा जाता है। इन दो मीडिया गोजातीय सेरुन एल्ब्यूमिन (बीएसए) और टेल्यूराइट अंडे की जर्दी में जोड़ा जाता है। भारतीय मछलियों के लिए, उनके बाद के घटकों में संशोधन करके कई एक्सटेंडरों की कोशिश की गई थी।
आम घटक सोडियम क्लोराइड, KCI, CaCl2, NaHCO 3, Na 2 HPO 4 और MgSO4 हैं। इन के अलावा, पोषक तत्व और ग्लाइसीन भी क्रायोप्रेज़र्वेशन को बेहतर बनाने के लिए जोड़े जाते हैं। अगर जरूरत हो तो एंटीबायोटिक्स जैसे जेंटोमाइसिन या स्ट्रेप्टोमाइसिन को भी एक्सटेंडर के घोल में मिलाया जाता है।
cryoprotectant:
क्रायोप्रोटेक्टेंट का मुख्य कार्य सेल में घुसना है और शुक्राणुजोज़ा को ठंड के तापमान को सहन करने में मदद कर सकता है। सबसे महत्वपूर्ण और व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला डीएसएमओ (डाइमेथाइल सल्फॉक्साइड) और ग्लिसरॉल है। हार्वे (1983) ने दूध पाउडर या अंडे की जर्दी के साथ संयोजन में मेथनॉल, डीएसएमओ और ग्लिसरॉल का इस्तेमाल किया।
क्रायोप्रोटेक्टेंट और एक्सटेंडर समाधान एक निश्चित अनुपात में, आमतौर पर क्रायोप्रोटेक्टेंट के एक भाग और एक्सटेंडर समाधान के नौ भागों को मंदक के रूप में जाना जाता है। इस मंदक में शुक्राणुओं को जमने के लिए आगे की प्रक्रिया के लिए एकत्र किया जाता है।
मंदक (क्रायोप्रोटेक्टेंट + एक्सटेंडर + स्पर्म) को पॉलीविनाइल स्ट्रॉ में लिया जाता है और स्ट्रॉ के दोनों सिरों को सील कर दिया जाता है और अब वे ठंड या ठंड लगने के लिए तैयार हैं। मिल को ठंडा किया जा सकता है, तापमान 0-5 o C. के बीच बनाए रखा जाता है। ठंड में CO 2 और तरल नाइट्रोजन का उपयोग किया जाता है, टेलोस्ट मिल्ट (0-50 o C) के चिल्ड स्टोरेज का सैल्मोनिड में बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है।
ठंड की प्रक्रिया में कई समस्याओं जैसे कि ठंड के झटके, इंट्रासेल्युलर बर्फ के गठन और आसमाटिक सदमे को नियंत्रित किया जाना चाहिए। क्रायोप्रेज़र्वेशन का अर्थ है आमतौर पर कोशिकाओं या ऊतक का भंडारण -196 o C, तरल नाइट्रोजन का तापमान (चित्र। 22.1)।
सेल की चोट को नियंत्रित किया जाना चाहिए। तीन प्रकार की कोशिका की चोट आम तौर पर होती है। पहला ठंड का झटका है, जो ठंड के तापमान से ऊपर ठंडा होने के कारण होता है। यह ओवा के लिए अधिक महत्वपूर्ण है, शुक्राणुओं के लिए बहुत महत्वपूर्ण नहीं है।
यह 0 ° C तक होता है। जब तापमान 0 ° C और -80 ° C से ऊपर चला जाता है तो आसमाटिक शॉक और ओवा और शुक्राणु में इंट्रासेल्युलर बर्फ का निर्माण होता है। सफल क्रायोप्रेज़र्वेशन के लिए इन चीजों को नियंत्रित किया जाता है।
संक्षेप में, तनु युक्त तिनके को कनस्तरों में स्थानांतरित कर दिया जाता है। अलग-अलग संतुलन अवधि की अनुमति देने के बाद पुआल पकड़े हुए कनस्तरों को पहले तरल नाइट्रोजन वाष्प में और फिर तापमान -196 डिग्री सेल्सियस पर तरल नाइट्रोजन में डुबोया जाता है। लेगेंद्र और बिलार्ड (1980) ने सूखे बर्फ (ठोस सीओ 2 -79 डिग्री सेल्सियस) में इंद्रधनुष ट्राउट्स के शुक्राणुओं को संग्रहीत किया या 6 महीने तक तरल नाइट्रोजन में।
ताजे पानी की कई प्रजातियों में ठंडी हवा में शुक्राणुओं को रोककर ठंड को दूर किया जाता है। 0 ° C से -70 ° C तक का संक्रमण लगभग 2 मिनट तक रहता है जिसके परिणामस्वरूप 35 o C / मिनट की दर होती है। चूंकि ऊपर की दर घट जाती है - 60 डिग्री सेल्सियस। सबसे अच्छे परिणाम तरल नाइट्रोजन में प्राप्त होते हैं।
विगलन:
पिघलना ठंड की रिवर्स घटना है। पिघलना पानी के स्नान में 10 डिग्री सेल्सियस से 60 डिग्री सेल्सियस तक के तापमान पर किया जाता है। पूरी प्रक्रिया की सफलता शुक्राणुजोज़ा की गतिशीलता और डिंब को निषेचित करने की क्षमता पर निर्भर करती है।
स्टॉस और होल्ट्ज़ (1982) ने 120 एनएम NaHCO 3 समाधान के साथ सक्रिय करके गुलाबी सैल्मन शुक्राणुजोज़ा की गतिशीलता को 30 सेकंड से 10 मिनट तक बढ़ा दिया है, जिसमें 1 बीएमएक्स (3-आइसोब्यूटिल- 1-मिथाइल ज़ेंथियम) जोड़ा गया था। कुमार (1989) ने कहा कि भंडारण अवधि की अवधि क्रायोजेनिक स्थिति के तहत एल। रोहिता और एच। मॉलीट्रिक्स में लगभग 20 दिन है।
Salmo gairdeneri, Onchorhynchus kisutch और O.keta के अंडों को स्ट्रिपिंग की प्रक्रिया से हटाकर प्लास्टिक बैग में सील कर सील कर दिया गया और साथ में कोइलोमिक तरल पदार्थ के साथ 1 ° C पर ऑक्सीजन में रखा गया। फिर अंडों को एक या दो अंडों की परत के रूप में फैलने दिया जाता है।
अंडे तो प्रत्यारोपित समाधान और क्रायोप्रोटेक्टेंट के साथ लगभग उसी तरह से मिश्रित होते हैं जैसे कि पहले शुक्राणुओं के लिए वर्णित थे। हार्वे और केली (1984) के अनुसार, ओवो का भंडारण (ठंडा) भंडारण सामन में मामूली रूप से सफल रहा है, कुछ हफ्तों के क्रम में भंडारण के समय को कोलाइमिक द्रव में ऑक्सीजन युक्त अंडों के प्रशीतन के माध्यम से प्राप्त किया जाता है।
