स्टडी नोट्स एडवांस फ्लो साइटोमेट्री पर
नीचे उल्लिखित लेख अग्रिम प्रवाह साइटोमेट्री पर अध्ययन नोट्स प्रदान करता है।
फ्लो साइटोमेट्री पिछले दो दशकों के दौरान विकसित की गई तकनीक है, जो सेल की सामग्री विशेष रूप से परमाणु पैकिंग दक्षता का अध्ययन करती है। एनपीई के अलावा, विभिन्न कोशिकाओं और रोग स्थितियों की सामग्री की भौतिक और रासायनिक विशेषताओं का सही निष्कर्ष के साथ जल्दी से विश्लेषण किया जा सकता है।
फ्लो साइटोमीटर मशीन के रूप में बाजार में उपलब्ध हैं। मशीन में तरल पदार्थ प्रणाली होती है, जो लेजर से गुजरने वाली कोशिकाओं के रूप में उत्पन्न प्रकाश संकेतों को इकट्ठा करने के लिए एक ऑप्टिकल प्रणाली है। मशीन को इलेक्ट्रॉनिक सिस्टम भी प्रदान किया जाता है जो प्रकाश संकेतों को आनुपातिक इलेक्ट्रॉनिक संकेतों में परिवर्तित करता है जो अंततः कंप्यूटर विश्लेषण के लिए डिजीटल होते हैं।
लगभग 5000 कोशिकाएं प्रति सेकंड, एक के बाद एक अलग-अलग माप कर, विषम जनसंख्या के निलंबन से स्कैन किया जा सकता है।
परिष्कृत डिज़ाइन किए गए फ़्यूलिक्स सिस्टम को लेजर, ऑप्टिक्स, इलेक्ट्रॉनिक्स और सॉर्टिंग के साथ प्रदान किया जाता है। Fludics प्रणाली में प्रतिदीप्ति सक्रिय सेल सॉर्टर (FACS Calibur तरल पदार्थ प्रणाली) है, छँटाई के दौरान यह एकल कक्ष गणना सटीकता को सॉर्ट कर सकता है।
परिणाम रिकवरी के साथ उच्च शुद्धता है जो सिंगल सेल और रिकवरी के बीच आता है। PRIME, STAND BY, और RUN ऑपरेशनल मोड को चुनने के लिए इसे तीन बटन के साथ इलेक्ट्रॉनिक रूप से नियंत्रित किया गया है। दर उच्च के रूप में नियंत्रण कर रहे हैं; (60ul / मिनट), मध्यम (35 उल / मिनट) और निम्न (12 उल / मिनट)।
उत्तेजना और उत्सर्जन, फ्लोरोक्रोमेस, फिल्टर और रंग मुआवजा उपकरण का महत्वपूर्ण हिस्सा हैं। 530/30 बीपी फिल्टर उपाय प्रतिदीप्ति आइसोथियोसाइनेट (दाग) द्वारा उत्सर्जित संकेत। यदि Phycoerythrin और Popidium Iodide का उपयोग किया जाता है तो 585/42 BP फ़िल्टर का उपयोग किया जाता है। यदि पेरिडिनिन क्लोरोफिल और 7-एमिनो-एक्टिनोमाइसिन डी सिग्नल उत्पन्न होते हैं तो 650 एलपी फिल्टर का उपयोग किया जाता है।
लेजर सिग्नल बैक्टन डिकिंसन सेल सर्च सॉफ्टवेयर द्वारा पढ़े जाते हैं। इंस्ट्रूमेंट डिटेक्टर और बैंड फिल्टर को इंस्ट्रूमेंट के इंस्ट्रक्शन और आवश्यकता के अनुसार एडजस्ट किया जाना है। 488 एनएम आर्गन लेजर प्रकाश स्रोत और 623 एनएम बैंड पास फिल्टर आमतौर पर उपकरणों में मौजूद होते हैं।
यह भी डेटा और विश्लेषण प्रदर्शित करने के लिए प्रणाली है। महत्वपूर्ण पैरामीटर हिस्टोग्राम, मल्टी-पैरामीटर डेटा और सूची मोड डेटा और गेटिंग हैं। सॉफ्टवेयर की सहायता से डेटा का मशीन विश्लेषण और डीएनए सामग्री बनाम गिनती के हिस्टोग्राम प्रदान करते हैं जो कंप्यूटर पर स्वचालित रूप से प्रदर्शित होते हैं (49.2)।
फ्लो साइटोमीटर के अनुप्रयोग कई हैं और जैविक अनुसंधान के लिए और कई मानव रोगों में नैदानिक जांच के लिए एक वरदान हैं। फ्लो साइटोमीटर का उपयोग वायु श्वास लेने वाली मछलियों के सिर की किडनी कोशिकाओं में हेमोपोइटिक ऊतक में रक्त की अलसी के अध्ययन के लिए किया जाता है।
प्लुरिपोटेंट हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल और परिपक्व कार्यात्मक, परिधीय लिम्फोसाइट आबादी के फेनोटाइप के बीच अंतर करना आसान हो सकता है। इस उपकरण का महत्वपूर्ण उपयोग एपोप्टोसिस या कोशिका मृत्यु का अध्ययन करना है और कीटनाशक विषाक्तता के कारण कोशिका के परिगलन का अध्ययन करना है।
चौड़े कोण के बिखराव संकेतों के कारण लिम्फोसाइट्स, मोनोसाइट्स और ग्रैनुलोसाइट्स को लाइसिड पूरे रक्त नमूना से हल करना संभव है। प्लेटलेट को शोर से अलग करना भी संभव है। इसका उपयोग प्रतिरक्षा प्रणाली और इम्युनोफेनोटाइपिंग में किया जाता है। इसका उपयोग ल्यूकेमिया, और लिम्फोमा, प्रत्यारोपण अनुसंधान, रेटिकुलोसाइट गणना और सेलुलर डीएनए सामग्री के विश्लेषण का अध्ययन करने के लिए किया जाता है।
नाड़ी प्रसंस्करण तंत्र के कारण, यह डीएनए सेल-चक्र विश्लेषण में फायदेमंद है। एनपीई विश्लेषण का उपयोग प्राथमिक स्तन कैंसर और मेटास्टेसिस, प्राथमिक बृहदान्त्र कैंसर और बृहदान्त्र मेटास्टेसिस के साथ-साथ गैस्ट्रिक और डिम्बग्रंथि के कैंसर (चित्र। 49.2) के लिए किया जाता है।
इस्तेमाल किया प्रोटोकॉल है कि पहले कोशिकाओं को हटा दिया गया और 3% paraformaldehyde में तय किया गया। उन्हें 0.5% ट्राइटन x 100 के साथ पारगम्य किया गया। परमाणु डीएनए को तब साइकल टेस्ट प्लस डीएनए किट का उपयोग करके RNase उपचार के बाद पॉपिडियम आयोडाइड के साथ लेबल किया गया था।
