जिलेटिनस निर्माण द्वारा हाइड्रोलाइड जिलेटिन के लिए उनकी क्षमता का पता लगाने के लिए बैक्टीरिया पर ऑक्सीडेज टेस्ट

बैक्टीरिया पर ऑक्सीडेज टेस्ट जिलेटिनस निर्माण द्वारा हाइड्रोलाइज जिलेटिन के लिए उनकी क्षमता का पता लगाने के लिए!

सिद्धांत:

कुछ बैक्टीरिया जिलेटिन को हाइड्रोलाइज करने की क्षमता रखते हैं, क्योंकि वे प्रोटीयोलाइटिक एंजाइम 'जिलेटिनस' का उत्पादन कर सकते हैं।

जबकि जिलेटिन पारभासी उत्पादन करने वाले मर्क्यूरिक क्लोराइड द्वारा अवक्षेपित हो जाता है, इसके हाइड्रोलाइज़्ड अंत उत्पाद मर्क्यूरिक क्लोराइड द्वारा अवक्षेपित नहीं हो जाते हैं, जिसके लिए वे इस तरह के पारभासी का उत्पादन नहीं करते हैं, बल्कि पारदर्शिता का उत्पादन करते हैं।

जिलेटिनाइज टेस्ट में जिलेटिन युक्त अगर प्लेटों पर टेस्ट बैक्टीरिया को उगाया जाता है। बैक्टीरिया के उपनिवेश दिखाई देने के बाद, प्लेटों को मरक्यूरिक क्लोराइड के घोल से भर दिया जाता है। यदि बैक्टीरिया जिलेटिन को हाइड्रोलाइज करने की क्षमता रखता है, तो इसकी कॉलोनियां आसपास के क्षेत्रों में जिलेटिन को मध्यम रूप से हाइड्रोलाइज करती हैं, जबकि प्लेटों के बाकी क्षेत्र निर्जलित जिलेटिन को बनाए रखते हैं।

परिणामस्वरूप, जब मर्क्यूरिक क्लोराइड के घोल से भर जाता है, तो उपनिवेशों के चारों ओर पारदर्शी स्पष्ट क्षेत्र बन जाते हैं, क्योंकि उनके आसपास बनने वाले हाइड्रोलाइड उत्पाद मर्क्यूरिक क्लोराइड के साथ अवक्षेप नहीं बनाते हैं। दूसरी ओर, प्लेटों के बाकी क्षेत्र पारभासी हो जाते हैं, क्योंकि इन क्षेत्रों में निर्जलित जिलेटिन मर्क्यूरिक क्लोराइड के साथ अवक्षेपित हो जाते हैं।

सामग्री की आवश्यकता:

पेट्री डिश, शंक्वाकार फ्लास्क, कॉटन प्लग, इनोक्युलेटिंग लूप, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लैमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, फ्राइज़र के जिलेटिन अगर, मर्क्यूरिक क्लोराइड सॉल्यूशन, अलग-अलग कॉलोनियों या बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों।

प्रक्रिया:

1. दो पेट्री डिश को साफ किया जाता है, क्राफ्ट पेपर से ढका जाता है और धागे या रबर बैंड (चित्रा 7.20) से बंधा होता है। इस चरण के साथ-साथ चरण 6 पर पेट्री डिश के नसबंदी को छोड़ दिया जाता है, अगर ओवन-निष्फल पेट्री डिश सीधे उपयोग किया जाता है

2. फ्राइज़र के जिलेटिन अगर माध्यम (मुख्य घटक के रूप में जिलेटिन युक्त) या इसके तैयार किए गए पाउडर के माध्यम के 100 मिलीलीटर के लिए आवश्यक सामग्री को 100 मिली और आसुत जल के 100 मिलीलीटर में 250 मिलीलीटर शंक्वाकार फ्लास्क में हिलाया और घुमाया जाता है। ।

3. इसका पीएच एक पीएच पेपर या पीएच मीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है और यदि यह कम है, तो 0.1N HCI का उपयोग करके इसे 0.1N HCI का उपयोग करके समायोजित किया जाता है।

4. पूरी तरह से मध्यम में अगर को भंग करने के लिए फ्लास्क को गरम किया जाता है।

5. फ्लास्क कपास-प्लग है, शिल्प कागज के साथ कवर किया गया है और धागे या रबर बैंड के साथ बांधा गया है।

6. दो पेट्री डिश और शंक्वाकार फ्लास्क युक्त फ्राइज़र के जिलेटिन अगर माध्यम को आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस (15 साई दबाव) पर निष्फल किया जाता है।

7. नसबंदी के बाद, उन्हें आटोक्लेव से हटा दिया जाता है और माध्यम को जमने की अनुमति दिए बिना कुछ समय के लिए ठंडा करने की अनुमति दी जाती है। माध्यम के ठंडा होने से प्लेटों के अंदर पानी की बूंदों के संघनन और संचय को रोकता है। यदि माध्यम पहले से ही तैयार किया गया है और भंडारण के दौरान जम गया है, तो इसे पूरी तरह से पिघलने तक सावधानी से गर्म करके तरलीकृत करना होगा।

8. जिलेटिन अगर प्लेटों को तैयार करने के लिए, निष्फल फ्रैजियर के जिलेटिन अगर मध्यम ठंडा होने से पहले और जम जाता है, गर्म पिघली हुई स्थिति में, इसे असमान रूप से डाला जाता है, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष के अंदर, दो स्टेरिल पेट्री डिश (लगभग 20 मिलीलीटर प्रत्येक) में, ताकि। कि पिघला हुआ माध्यम पेट्री डिश के निचले हिस्से को पूरी तरह से कवर करता है।

फिर, प्लेटों को उनके ढक्कन के साथ कवर किया जाता है और ठंडा करने की अनुमति दी जाती है, ताकि उनमें माध्यम को ठोस किया जा सके। लगभग 1 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक इनक्यूबेटर में प्लेटों और पलकों को उलटा रखने से प्लेटों और पलकों की आंतरिक सतह पर घनीभूत हो सकने वाले जल वाष्प का वाष्पीकरण हो जाता है।

9. प्रत्येक प्लेट को नीचे की तरफ चार तिमाहियों में चिह्नित किया गया है।

9. टेस्ट बैक्टीरिया का "स्पॉट इनोक्यूलेशन" असमान रूप से, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष के अंदर किया जाता है, प्रत्येक तिमाही के केंद्र पर एक लौ-निष्फल लूप की मदद से बैक्टीरिया का एक स्पॉट (या छोटा धब्बा) बनाकर। लूप को प्रत्येक इनोक्यूलेशन के बाद निष्फल किया जाता है।

11. inoculated प्लेटों को औंधा स्थिति में ऊष्मायन किया जाता है, ऊपर से नीचे 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 से 48 घंटों के लिए एक इनक्यूबेटर में जब तक कि बैक्टीरिया की कॉलोनियां दिखाई नहीं देती हैं।

12. प्लेटें मरक्यूरिक क्लोराइड (HgCl ₂ ) के घोल से भर जाती हैं।

टिप्पणियों:

बैक्टीरिया की कॉलोनियों के चारों ओर पारदर्शी स्पष्ट क्षेत्र: जिलेटिनस पॉजिटिव।

पारदर्शी स्पष्ट क्षेत्र बैक्टीरिया की कालोनियों के आसपास नहीं बनते: जिलेटिनस नकारात्मक।