एक बैक्टीरिया के एसिड-फास्ट धुंधला होने पर प्रयोग

एक बैक्टीरिया के एसिड-फास्ट धुंधला हो जाने पर प्रयोग यह पता लगाने के लिए कि यह एसिड-फास्ट या गैर-एसिड-फास्ट है!

उद्देश्य:

ज्यादातर बैक्टीरिया को दाग दिया जा सकता है, या तो साधारण बुनियादी धुंधला या चना धुंधला द्वारा, क्योंकि उनकी कोशिकाएं आसानी से दाग उठाती हैं।

हालाँकि, कुछ बैक्टीरिया में लिपिड पदार्थों से बनी मोटी मोमी कोशिका की दीवार होती है।

इस तरह के बैक्टीरिया दाग होना बेहद मुश्किल है, क्योंकि साधारण जलीय दाग आसानी से उनकी कोशिकाओं में प्रवेश नहीं कर सकते हैं, लेकिन एक बार दाग लगने के बाद; डिकोलोराइजिंग एजेंट के रूप में एसिड-अल्कोहल के जोरदार उपयोग के साथ, उनकी कोशिकाओं से दाग को हटाना भी उतना ही मुश्किल है। ये बैक्टीरिया एसिड-फास्ट स्टेनिंग द्वारा दागदार होते हैं।

इस प्रकार, एसिड-फास्ट धुंधला हो जाना, ग्राम धुंधला के समान, एक अंतर धुंधला विधि है, जो बैक्टीरिया को अलग करता है, उनकी कोशिका की दीवार की प्रकृति के आधार पर, दो समूहों में निम्नानुसार है:

(1) एसिड-फास्ट बैक्टीरिया:

एक बैक्टीरिया, जिस पर दाग लगना बेहद मुश्किल है, लेकिन एक बार दाग लगने के बाद, उसकी कोशिकाओं से दाग को हटाना उतना ही मुश्किल होता है, यहां तक कि एसिड-अल्कोहल को डिकोलराइजिंग एजेंट के रूप में इस्तेमाल करने पर भी एसिड-फास्ट बैक्टीरिया (एसिड-लविंग) होता है। बैक्टीरिया)।

उदाहरण: माइकोबैक्टीरियम एसपीपी। [एम तपेदिक (टीबी बैक्टीरिया), एम। लेप्राइ (कुष्ठ रोग बैक्टीरिया), एम। स्मेग्माटिस (स्मेग्मा के प्राकृतिक बैक्टीरिया) और एम। मेरिनम (समुद्री मछलियों के टीबी बैक्टीरिया)। उनके पास लिपिड सामग्रियों से बनी मोटी मोमी सेल की दीवार होती है।

(2) गैर-एसिड-फास्ट बैक्टीरिया:

एक बैक्टीरिया, जिसे दागना आसान है और एसिड-अल्कोहल द्वारा डिकॉलेराइजिंग एजेंट के रूप में डिकॉलेराइज़ करना भी आसान है, एक गैर-एसिड-फास्ट बैक्टीरिया (गैर-एसिड-लविंग बैक्टीरिया) है। उदाहरण: माइकोबैक्टीरियम एसपीपी को छोड़कर सभी बैक्टीरिया। इन बैक्टीरिया में, कोशिका की दीवार मोटी और मोमी नहीं होती है।

एसिड-फास्ट धुंधला एसिड-फास्ट और गैर-एसिड-फास्ट बैक्टीरिया को अलग करने में उपयोगी है और जीनस माइकोबैक्टीरियम से संबंधित बैक्टीरिया की पहचान में भी है।

सिद्धांत:

एसिड-फास्ट बैक्टीरिया गैर-एसिड-फास्ट बैक्टीरिया से अलग होते हैं, वे लिपिड सामग्री से बने एक मोटी मोमी कोशिका की दीवार होते हैं। साधारण जलीय दाग, जैसे कि मिथाइलीन ब्लू या क्रिस्टल वायलेट इस मोमी कोशिका भित्ति के माध्यम से अपनी कोशिकाओं में प्रवेश नहीं कर सकते हैं।

हालांकि, लाल रंग का फेनोलिक प्राथमिक दाग कार्बोलिक फ़्यूचिन (कार्बोलिक एसिड या फ़ेनॉल + बेसिक फ़्यूचिन); जो कोशिका भित्ति के लिपिड पदार्थों में घुलनशील है, कोशिका भित्ति के माध्यम से अपनी कोशिकाओं में प्रवेश कर सकता है और लाल रंग प्रदान करने वाली कोशिकाओं के अंदर इसे बनाए रखा जा सकता है।

पेनेट्रेशन को गर्मी के अनुप्रयोग द्वारा और अधिक संवर्धित किया जाता है, जो लिपोइडल दीवार के माध्यम से साइटोप्लाज्म में कार्बोलिक फ़्यूचिन को चलाता है। (इस Ziel- Neelsen विधि का एक मामूली संशोधन दाग को गीला एजेंट, तुर्गिटोल के अलावा का वर्णन करता है, जो सेल की दीवार और दाग के बीच सतह के तनाव को कम करता है, जिससे हीटिंग की आवश्यकता नहीं होती है)। कोशिकाओं को ठंडा करने की अनुमति दी जाती है, ताकि मोमी कोशिका की दीवार को सख्त किया जा सके।

जब कोशिकाओं को डिकोलराइजिंग एजेंट, एसिड-अल्कोहल के संपर्क में लाया जाता है, तो वे डीकोलेराइजेशन का विरोध करते हैं, क्योंकि प्राथमिक दाग डिकॉलेराइजिंग एजेंट की तुलना में सेलुलर वैक्स में अधिक घुलनशील होता है। इसके बाद, जब मिथाइलीन नीले रंग के साथ काउंटर-दाग किया जाता है, तो यह मोमी सेल की दीवार के माध्यम से कोशिकाओं में प्रवेश नहीं कर सकता है।

इस प्रकार, अंत में एसिड-फास्ट बैक्टीरिया प्राथमिक दाग के लाल रंग को बरकरार रखते हैं और लाल दिखाई देते हैं। दूसरी ओर, गैर-एसिड-फास्ट बैक्टीरिया प्राथमिक दाग को आसानी से उठाते हैं और आसानी से विघटित हो जाते हैं। जब मेथिलीन नीले रंग के साथ दाग-धब्बेदार होते हैं, तो ये रंगहीन कोशिकाएं एसिड-फास्ट बैक्टीरिया के विपरीत, आसानी से काउंटर-दाग को भी ले लेती हैं और नीले रंग की दिखाई देती हैं।

सामग्री की आवश्यकता:

स्लाइड, लूप, प्राथमिक दाग (कार्बोलिक फ्यूसीन), डिकोलोराइजिंग एजेंट (एसिड-अल्कोहल), काउंटर स्टेन (मिथाइलीन ब्लू), हॉट प्लेट, बैक्टीरिया, माइक्रोस्कोप, विसर्जन तेल की शोरबा / तिरछी / प्लेट संस्कृति।

प्रक्रिया:

1. नल के पानी के नीचे एक स्लाइड को अच्छी तरह से साफ किया जाता है, जैसे कि पानी इसकी सतह पर बूंदों के रूप में नहीं रहता (चित्र 5.12)।

2. पालन करने वाले पानी को बिबुलस पेपर से मिटा दिया जाता है और स्लाइड को हवा में सुखाया जाता है।

3. बैक्टीरिया का एक स्मीयर स्लाइड के केंद्र में दो तरीकों से तैयार किया जाता है।

(a) अगर अग्र प्लेट या अगर तिरछी तरफ उगने वाले बैक्टीरिया को देखा जाए, तो पानी की एक बूंद स्लाइड के केंद्र में डाल दी जाती है और प्लेट या तिरछा से बैक्टीरिया का एक लूप लौ पर स्टरलाइज़ करके इसे स्थानांतरित कर दिया जाता है । फिर, ड्रॉप में लूप के धीमे रोटेशन द्वारा, एक बैक्टीरिया निलंबन बनाया जाता है और यह तब तक फैलता है जब तक कि एक धब्बा प्राप्त नहीं हो जाता।

(b) यदि तरल शोरबा में पैदा होने वाले बैक्टीरिया को देखा जाए, तो बैक्टीरिया के निलंबन की एक बूंद को सीधे लौ-स्टरलाइज़ किए गए लूप द्वारा स्लाइड के केंद्र में रखा जाता है और एक स्मीयर फैलाकर बनाया जाता है।

4. स्मीयर हवा से सुखाया जाता है।

5. स्मीयर को गर्म करके तय किया जाता है। सेलुलर प्रोटीन के जमावट में हीटिंग का परिणाम होता है, जिसके कारण कोशिकाएं स्लाइड की सतह पर चिपक जाती हैं और धुंधला होने के दौरान धुल नहीं जाती हैं। हीट- फिक्सेशन को 2-3 बार आंच से ऊपर करके स्लाइड को स्मियर सतह के साथ ऊपर की ओर करते हुए फिक्सिंग किया जाता है, ताकि स्मियर गर्म न हो जाए।

6. स्मीयर को कार्बोलिक फ़्यूचिन से भरा गया है

7. स्लाइड को गर्म गर्म प्लेट पर रखा जाता है, जिससे तैयारी को 5 मिनट तक भाप देने की अनुमति मिलती है। गर्म प्लेट का तापमान इतना समायोजित किया जाता है कि, तैयारी उबलती नहीं है और जल्दी से वाष्पित हो जाती है। वाष्पीकरण नुकसान को फिर से भरना है, ताकि धब्बा सूख न जाए। (हीटलेस विधि के लिए, स्मीयर को 3-5 मिनट के लिए कार्बुल फ़्यूचिन युक्त टर्गिटोल से भरा जाता है)।

8. स्लाइड को गर्म प्लेट से हटा दिया जाता है और ठंडा किया जाता है।

9. अतिरिक्त दाग धब्बा से धीरे से बहने वाले नल के पानी के नीचे धोया जाता है, इस तरह से, पानी सीधे धब्बा पर नहीं गिरता है।

10. डिकोलराइजिंग एजेंट, एसिड-अल्कोहल, ड्रॉप द्वारा स्मीयर ड्रॉप पर जोड़ा जाता है, जब तक कि कार्बोक्ल फ्यूचिन स्मियर से धोने में विफल रहता है।

11. एसिड-अल्कोहल को धीरे से बहने वाले नल के पानी के नीचे धब्बा से धोया जाता है, इस तरह से, पानी सीधे धब्बा पर नहीं गिरता है।

12. स्मीयर को 2 मिनट के लिए काउंटर-स्टेन, मेथिलीन ब्लू के साथ बाढ़ दिया गया है।

13. अतिरिक्त काउंटर-दाग धब्बा से धीरे से बहने वाले नल के पानी के नीचे से धोया जाता है, इस तरह से, पानी सीधे धब्बा पर नहीं गिरता है।

14. स्लाइड को बिबुलस पेपर के साथ सुखाया जाता है।

15. स्लाइड को माइक्रोस्कोप के चरण तक ले जाया जाता है और स्मीयर को कम शक्ति और उच्च शुष्क उद्देश्यों के तहत मनाया जाता है।

16. विसर्जन तेल की एक बूंद धब्बा पर डाली जाती है।

17. धब्बा तेल-विसर्जन उद्देश्य के तहत मनाया जाता है।