डिनो टेस्ट में एमिनो एसिड ट्रिप्टोफैन (चित्रा के साथ) हाइड्रोलाइज करने के लिए एक बैक्टीरिया की क्षमता का पता लगाने के लिए

डोल टेस्ट में एमिनो एसिड ट्रिप्टोफैन को हाइड्रोलाइज करने के लिए एक बैक्टीरिया की क्षमता का पता लगाने के लिए!

सिद्धांत:

कुछ बैक्टीरिया में अमीनो एसिड ट्रिप्टोफैन को इंडोल करने के लिए हाइड्रोलाइज करने की क्षमता होती है, क्योंकि वे एंजाइम 'ट्रिप्टोफैनस' का उत्पादन कर सकते हैं।

ट्रिप्टोफैन इंडोल, पाइरुविक एसिड और अमोनिया के उत्पादन के साथ हाइड्रोलाइज्ड है। इंडोल का पता रंग अभिकर्मक, पैराडिमिथाइलामिनोबेंज़ाल्डिहाइड (पी-डीएमएबी, कोवैक के अभिकर्मक) से लगाया जाता है, जो एक गुलाबी वलय का निर्माण करता है। इंडोल पी-डीएमएबी के साथ यौगिक 'क्विनोलाइड रेड वॉयलेट कंपाउंड (रोजसिंडोल डाई)' का उत्पादन करता है, जो कि गुलाबी रंग का होता है। अंगूठी सतह पर उत्पन्न होती है, क्योंकि अभिकर्मक एमाइल अल्कोहल में तैयार किया जाता है।

इण्डोल टेस्ट में, टेस्ट बैक्टोपॉन युक्त शोरबा माध्यम में टेस्ट बैक्टीरिया को उगाया जाता है। यदि बैक्टीरिया में ट्रिप्टोफैन को हाइड्रोलाइज करने की क्षमता है, तो पी-डीएमएबी के अलावा शोरबा संस्कृति की सतह पर एक गुलाबी अंगूठी बनती है।

सामग्री की आवश्यकता:

टेस्ट ट्यूब, शंक्वाकार फ्लास्क, कॉटन प्लग, इनोक्युलेटिंग लूप, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लैमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, ट्रिप्टोन ब्रोथ, कोवाक के अभिकर्मक (पैराडिमिमाइलिनोबेनजेल्डिहाइड), पृथक कालोनियों या बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों।

प्रक्रिया:

1. 100 मिलीलीटर शोरबा के लिए आवश्यक ट्रिप्टोन ब्रोथ मीडियम या इसके तैयार पाउडर के अवयवों को 250 मिलीलीटर शंक्वाकार फ्लास्क में 100 मिलीलीटर डिस्टिल्ड वॉटर में मिलाया जाता है और हिलाया जाता है। ट्रिप्टोफेन ट्रिप्टोफैन के स्रोत के रूप में कार्य करता है। इसलिए, शोरबा में ट्रिप्टोफैन के अलावा वैकल्पिक है (चित्रा 7.3)।

2. इसका पीएच एक पीएच पेपर या पीएच मीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है और यदि यह कम है तो 0.1N HC1 का उपयोग करके 7.5 पर समायोजित किया जाता है यदि यह अधिक है या 0.1N NaOH का उपयोग कर रहा है। कुप्पी को गर्म किया जाता है, यदि आवश्यक हो, तो सामग्री को पूरी तरह से भंग करने के लिए।

3. शोरबा को पांच परीक्षण ट्यूबों (लगभग 5 मिलीलीटर प्रत्येक), कपास-प्लग में बांटा गया है, शिल्प कागज के साथ कवर किया गया है और धागे या रबर बैंड के साथ बांधा गया है।

4. शोरबा ट्यूबों को आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस (15 साई दबाव) पर निष्फल किया जाता है।

5. शोरबा ट्यूबों को कमरे के तापमान तक ठंडा करने की अनुमति है।

6. परीक्षण बैक्टीरिया को असंगत रूप से टीका लगाया जाता है, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष में, बन्सेन लौ के ऊपर निष्फल लूप की मदद से शोरबा में। लूप को प्रत्येक इनोक्यूलेशन के बाद निष्फल किया जाता है।

7. एक इनक्यूबेटर में 48 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनोकेटेड शोरबा ट्यूबों को ऊष्मायन किया जाता है।

8. रंग अभिकर्मक, पैरा-डाइमिथाइलामिनोबेंज़ाल्डिहाइड (पी-डीएमएबी), (यानी कोवाक का अभिकर्मक) शोरबा ट्यूबों (0.5 मिलीलीटर प्रत्येक) में गिरा दिया जाता है और 1 मिनट के बाद मनाया जाता है।

वैकल्पिक रूप से:

7. ऑक्सालिक एसिड में भिगोए गए पेपर स्ट्रिप्स को इनोकेटेड ब्रोथ ट्यूब्स के मुहाने पर रखा जाता है, ताकि पेपर स्ट्रिप्स का लगभग आधा हिस्सा ब्रोथ को छुए बिना ट्यूब के अंदर रहे और बाकी आधा बाहर तक रहे। इसके लिए, फिल्टर पेपर लगभग 35 मिमी लंबे और 5 मिमी चौड़े स्ट्रिप्स में कट जाता है। स्ट्रिप्स ऑक्सालिक एसिड के गर्म संतृप्त जलीय घोल में भिगोए जाते हैं और उपयोग से पहले सूख जाते हैं।

8. इनक्यूबेटेड शोरबा ट्यूबों को एक इनक्यूबेटर में 48 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है।