बैक्टीरिया का कैप्सूल धुंधला कैसे करें

बैक्टीरिया कैप्सूल का निरीक्षण करने के लिए बैक्टीरिया के कैप्सूल धुंधला करने का लक्ष्य रखें।

उद्देश्य:

कुछ बैक्टीरिया में, कोशिका की दीवार एक चिपचिपे सेल लिफाफे से घिरी होती है जिसे 'कैप्सूल' कहा जाता है। यह पॉलीसेकेराइड, ग्लाइकोप्रोटीन या पॉलीपेप्टाइड से बना है।

जब कैप्सूल प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत मनाया जाना बहुत पतला होता है, तो इसे 'माइक्रोकैपलस' कहा जाता है और जब यह इतना मोटा होता है कि कई कोशिकाएं कैप्सुलर मैट्रिक्स में एम्बेडेड होती हैं; इसे 'कीचड़' कहा जाता है।

कैप्सूल की उपस्थिति या अनुपस्थिति के आधार पर, बैक्टीरिया दो प्रकार के होते हैं:

(1) कैप्सूलेटेड बैक्टीरिया:

एक बैक्टीरिया, जिसमें कैप्सूल होता है, एक कैप्सूलेटेड बैक्टीरिया होता है।

(2) गैर-कैप्सूलेटेड बैक्टीरिया:

एक बैक्टीरिया, जिसमें कैप्सूल नहीं होता है, एक गैर-कैप्सूलेटेड बैक्टीरिया है

कैप्सूल स्टेनिंग का उद्देश्य बैक्टीरिया सेल से कैप्सुलर सामग्री को अलग करके बैक्टीरिया कैप्सूल का निरीक्षण करना है।

सिद्धांत:

कैप्सूल स्टेनिंग में, एक स्लाइड के केंद्र में बैक्टीरिया का एक धब्बा बनाया जाता है। यह ऊष्मा-नियत नहीं है, क्योंकि हीटिंग के कारण कोशिका संकोचन कोशिका के चारों ओर एक स्पष्ट क्षेत्र बना सकता है, जिसे कैप्सूल के रूप में गलत माना जा सकता है।

इसके अलावा, चूंकि कैप्सुलर सामग्री पानी में घुलनशील है और इसे जोरदार धुलाई से धोया जा सकता है, केवल दो अभिकर्मकों का उपयोग पानी के बीच-बीच में धुलाई के बिना किया जाता है। दो अभिकर्मकों में से एक प्राथमिक दाग, क्रिस्टल वायलेट है। यह दोनों को गहरे बैंगनी-नीले रंग, सेल के साथ-साथ कैप्सूल प्रदान करता है।

हालांकि, यह कोशिकीय घटकों के आयनिक प्रकृति के कारण कोशिका में 'अवशोषित' हो जाता है, जबकि यह कैप्सूल के लिए गैर-आयनिक प्रकृति के कारण, कैप्सूल में 'पालन' करता है। कोपुलर सामग्री की अव्यवस्था को रोकने के लिए, धब्बा पानी से धोया नहीं जाता है।

दूसरा अभिकर्मक, कॉपर सल्फेट एक डीकोलाइजिंग एजेंट और एक काउंटर-स्टेन के रूप में कार्य करता है। यह कोशिकाओं के आसपास से अतिरिक्त क्रिस्टल वायलेट को हटाने के साथ-साथ कैप्सूल का पालन करने वाले क्रिस्टल वायलेट को हटा देता है। यह कैप्सूल पर भी दाग लगाता है और उस पर हल्का नीला रंग डालता है। कैप्सूल अब हल्का नीला दिखाई देता है, जबकि सेल गहरे बैंगनी-नीले रंग का दिखाई देता है।

सामग्री की आवश्यकता:

स्लाइड, लूप, विसर्जन तेल, माइक्रोस्कोप, क्रिस्टल वायलेट दाग, कॉपर सल्फेट घोल (20%)।

प्रक्रिया:

1. नल के पानी के नीचे स्लाइड को अच्छी तरह से साफ किया जाता है, जैसे कि पानी इसकी सतह पर बूंदों के रूप में नहीं रहता है (चित्र 5.14)।

2. पालन करने वाले पानी को बिबुलस पेपर से मिटा दिया जाता है और स्लाइड को हवा में सुखाया जाता है।

3. बैक्टीरिया का एक स्मीयर स्लाइड के केंद्र में दो तरीकों से तैयार किया जाता है।

(ए) अगर अग्र प्लेट या अगर तिरछी तरफ उगने वाले बैक्टीरिया को देखा जाए, तो पानी की एक बूंद स्लाइड के केंद्र में डाल दी जाती है और प्लेट से बैक्टीरिया का एक लूप या तिरछा लौ पर बाँझ लूप द्वारा स्थानांतरित किया जाता है। फिर, ड्रॉप में लूप के धीमे रोटेशन द्वारा, एक बैक्टीरिया निलंबन बनाया जाता है और यह तब तक फैलता है जब तक कि एक धब्बा प्राप्त नहीं हो जाता।

(ख) यदि तरल शोरबा में पैदा होने वाले बैक्टीरिया को देखा जाना है, तो बैक्टीरिया के निलंबन की एक बूंद को सीधे लौ-निष्फल लूप द्वारा स्लाइड के केंद्र में रखा जाता है और एक धब्बा फैलाकर बनाया जाता है।

4. स्मीयर हवा से सुखाया जाता है। कोई गर्मी-निर्धारण नहीं किया जाता है क्योंकि परिणामी सेल संकोचन बैक्टीरिया के आसपास एक स्पष्ट क्षेत्र बना सकता है, जिसे कैप्सूल के रूप में गलत किया जा सकता है।

5. स्मीयर 5-7 मिनट के लिए प्राथमिक दाग, क्रिस्टल वायलेट से भर जाता है।

6. धब्बा को 20% कॉपर सल्फेट के घोल से धोया जाता है। कोपुलर सामग्री की अव्यवस्था को रोकने के लिए, धब्बा पानी से धोया नहीं जाता है।

7. स्लाइड को बिबुलस पेपर से सुखाया जाता है।

8. स्लाइड को माइक्रोस्कोप के चरण तक ले जाया जाता है और स्मीयर को कम शक्ति और उच्च शुष्क उद्देश्यों के तहत मनाया जाता है।

9. विसर्जन तेल की एक बूंद धब्बा पर डाली जाती है।

10. धब्बा तेल-विसर्जन उद्देश्य के तहत मनाया जाता है।