हाइड्रोजन सल्फाइड (चित्रा के साथ) का उत्पादन करने की क्षमता का पता लगाने के लिए बैक्टीरिया पर ट्रिपल शुगर आयरन टेस्ट
हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन करने की क्षमता का पता लगाने के लिए बैक्टीरिया पर ट्रिपल शुगर आयरन टेस्ट के बारे में जानने के लिए इस लेख को पढ़ें!
ट्रिपल शुगर आयरन टेस्ट (TSI टेस्ट) करने के लिए बैक्टीरिया की क्षमता का पता लगाने के लिए किसी भी एक या तीन शर्करा, जैसे कि ग्लूकोज, सुक्रोज और लैक्टोज के साथ-साथ हाइड्रोजन सल्फाइड (H 2) का उत्पादन करने की क्षमता का उपयोग करें। S), जो आयरन को कम करता है।
सिद्धांत:
कुछ बैक्टीरिया ग्लूकोज, सुक्रोज और लैक्टोज जैसे तीन शर्करा में से एक या अधिक का उपयोग करने की क्षमता रखते हैं।
यदि तीन शर्करा (ट्रिपल शक्कर) में से किसी एक या अधिक का उपयोग किया जाता है, तो एसिड का उत्पादन होता है, जो पीएच के रंग को लाल से पीले रंग में बदलकर पीएच को कम कर देता है।
इसके अलावा, कुछ बैक्टीरिया सल्फर यौगिकों का उपयोग करके हाइड्रोजन सल्फाइड (एच 2 एस) का उत्पादन करने की क्षमता रखते हैं। एच 2 एस इसलिए उत्पादित लौह यौगिक, लौह सल्फेट के साथ मिलकर लौह सल्फाइड के काले अवक्षेप बनाता है।
ट्रिपल शुगर आयरन टेस्ट (TSI टेस्ट) में, टेस्ट बैक्टीरिया को ग्लूकोज, सुक्रोज, लैक्टोज, फिनोल रेड, सोडियम थायोसल्फेट और फेरस सल्फेट युक्त अगर स्लाट्स पर उगाया जाता है। जबकि मध्यम में 0.1% की कम एकाग्रता में ग्लूकोज (यानी डी-ग्लूकोज या डेक्सट्रोज़) होता है, सुक्रोज़ और लैक्टोज की एकाग्रता को 1% पर उच्च रखा जाता है।
यदि बैक्टीरिया में तीन में से किसी एक या अधिक शर्करा का उपयोग करने की क्षमता है, तो माध्यम का रंग लाल से पीले रंग में बदल जाता है। यदि बैक्टीरिया में एच 2 एस का उत्पादन करने की क्षमता है, तो माध्यम एक काले रंग का अधिग्रहण करता है। चूंकि माध्यम में तीन शक्कर और एक लोहे के यौगिक का उपयोग किया जाता है, इसलिए परीक्षण को ट्रिपल शुगर आयरन टेस्ट कहा जाता है।
सामग्री की आवश्यकता:
टेस्ट ट्यूब, शंक्वाकार फ्लास्क, कॉटन प्लग, इनोक्युलेटिंग सुई, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लैमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, ट्रिपल शुगर आयरन (टीएसआई) अगर, पृथक कालोनियों या बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों।
प्रक्रिया:
1. टीएसआई अगर माध्यम की सामग्री (मुख्य घटकों के रूप में 3 शक्कर और लोहे से युक्त) या इसके तैयार किए गए पाउडर को माध्यम के 100 मिलीलीटर के लिए आवश्यक तौला जाता है और 250 मिलीलीटर शंक्वाकार फ्लास्क में आसुत जल के 100 मिलीलीटर में भंग कर दिया जाता है। मिलाते हुए और घूमता (चित्रा 7.7)।
2. इसका पीएच एक पीएच पेपर या पीएच मीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है और 0.1N HCI का उपयोग करके 7.4 से समायोजित किया जाता है यदि यह कम है या 0.1N NaOH का उपयोग कर रहा है यदि यह कम है।
3. पूरी तरह से मध्यम में अगर को भंग करने के लिए फ्लास्क को गरम किया जाता है।
4. इससे पहले कि यह जम जाए, गर्म पिघली हुई स्थिति में माध्यम को 5 टेस्ट ट्यूब (लगभग 20 मिलीलीटर प्रत्येक) में वितरित किया जाता है।
5. परखनली सूती-प्लग वाली होती हैं, जिन्हें क्राफ्ट पेपर से ढका जाता है और धागे या रबर बैंड से बांधा जाता है।
6. वे आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए 121 ° C (15 psi दबाव) पर निष्फल होते हैं।
7. नसबंदी के बाद, उन्हें आटोक्लेव से हटा दिया जाता है और मध्यम और ठंडा करने के लिए तिरछी स्थिति में रखा जाता है, ताकि टीएसआई एगर तिरछा हो सके।
8. परीक्षण बैक्टीरिया को असमान रूप से टीका लगाया जाता है, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष में, बट में चाकू मारकर और एक लौ- निष्फल सुई की मदद से तिरछी सतह पर टकराकर। प्रत्येक टीका के बाद सुई को निष्फल कर दिया जाता है।
9. एक इनक्यूबेटर में 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनोलेटेड तिरछी ऊष्मायन किया जाता है।
टिप्पणियों:
1। गैस उत्पादन के साथ या उसके बिना पीला बट और लाल तिरछा (अगर बट में टूट):
एसिड बट और क्षारीय तिरछा का गठन किया गया है। यहां केवल ग्लूकोज का उपयोग एनारोबिक रूप से (किण्विक रूप से) बट अम्लीय (पीला) किया जाता है। किसी अन्य चीनी का उपयोग नहीं किया गया है। चूंकि ग्लूकोज की सांद्रता कम (0.1%) होती है, तिरछी सतह पर उत्पादित एसिड की छोटी मात्रा तेजी से ऑक्सीकृत हो जाती है जिससे यह क्षारीय (लाल) हो जाता है।
इसके अलावा, माध्यम में मौजूद पेप्टोन का ऑक्सीडेटिव वर्चस्व एनएच वाई पैदा करता है जो तिरछी क्षारीय (लाल) बनाता है। हालांकि, बट में, एसिड की स्थिति ऑक्सीजन की कम उपलब्धता और जीवाणुओं की धीमी वृद्धि के कारण बनी हुई है। इस प्रकार, बैक्टीरिया ग्लूकोज सकारात्मक है।
2। पीले बट और पीले रंग के साथ या बिना गैस के उत्पादन में कमी:
एसिड बट और एसिड तिरछा का गठन किया गया है। यहां, लैक्टोज और / या सुक्रोज को किण्वित किया गया है। चूंकि माध्यम में उनकी एकाग्रता अधिक होती है, इसलिए वे बड़ी मात्रा में एसिड उत्पन्न करते हैं जिसके परिणामस्वरूप अम्लीय तिरछा और अम्लीय बट होता है और अम्लीय स्थिति को बनाए रखता है। इस प्रकार, बैक्टीरिया सुक्रोज / लैक्टोज सकारात्मक है।
3। लाल बट और लाल तिरछा:
तीनों शक्कर में से किसी को किण्वित नहीं किया गया है। इसके बजाय, पेप्टोन को एनारोबिक और / या एरोबिक स्थितियों के तहत अपचयित किया गया है, जिसके परिणामस्वरूप अमोनिया के उत्पादन के कारण क्षारीय स्थिति होती है।
यदि पेप्टोन का केवल एरोबिक क्षरण होता है, तो केवल तिरछी सतह क्षारीय (लाल) हो जाती है। यदि पेप्टोन का एरोबिक और एनारोबिक गिरावट है, तो तिरछा और बट दोनों ही क्षारीय (लाल) हो जाते हैं। इस प्रकार, बैक्टीरिया चीनी नकारात्मक है।
4। बट का काला पड़ना:
उपरोक्त शर्तों में से किसी एक के अलावा, यदि बट का कालापन होता है, तो यह इंगित करता है कि, जीवाणु मध्यम में मौजूद अकार्बनिक सल्फर (सोडियम थायोसल्फेट) का उपयोग करके एच 2 एस का उत्पादन करने में सक्षम है।
H 2 S, माध्यम में लौह सल्फेट के साथ मिलकर फेरस सल्फाइड के काले अवक्षेप बनाता है जिसके परिणामस्वरूप माध्यम का रंग काला हो जाता है। इस प्रकार, बैक्टीरिया एच 2 एस पॉजिटिव हैं।
5। बट का काला नहीं होना:
जीवाणु मध्यम में मौजूद अकार्बनिक सल्फर (सोडियम थायोसल्फेट) का उपयोग करते हुए एच 2 एस का उत्पादन करने में सक्षम नहीं है। इस प्रकार, बैक्टीरिया एच 2 एस नकारात्मक है।
