स्टार्च हाइड्रोलिसिस बैक्टीरिया पर हाइड्रोलाइज स्टार्च के लिए उनकी क्षमता का पता लगाने के लिए टेस्ट

स्टार्च हाइड्रोलिसिस बैक्टीरिया पर हाइड्रोलाइज स्टार्च के लिए अपनी क्षमता का पता लगाने के लिए टेस्ट!

सिद्धांत:

कुछ बैक्टीरिया स्टार्च को हाइड्रोलाइज़ करने की क्षमता रखते हैं, क्योंकि वे सैचुरोलाइटिक एंजाइम का उत्पादन कर सकते हैं।

जबकि स्टार्च आयोडीन के साथ गहरे नीले रंग का निर्माण करता है, इसके हाइड्रोलाइज्ड अंत उत्पाद आयोडीन के साथ ऐसे गहरे नीले रंग का अधिग्रहण नहीं करते हैं।

स्टार्च हाइड्रोलिसिस टेस्ट में, स्टार्च युक्त अगर प्लेटों पर टेस्ट बैक्टीरिया उगाए जाते हैं। बैक्टीरिया के उपनिवेश दिखाई देने के बाद, प्लेटों को आयोडीन के घोल से भर दिया जाता है। यदि बैक्टीरिया में स्टार्च को हाइड्रोलाइज करने की क्षमता है, तो इसकी कॉलोनियां आसपास के क्षेत्रों में माध्यम में स्टार्च को हाइड्रोलाइज कर देती हैं, जबकि प्लेटों के बाकी क्षेत्रों में अनहेल्दी स्टार्च होता है।

नतीजतन, जब आयोडीन के घोल से पानी भर जाता है, तो कॉलोनियों के आसपास पारदर्शी स्पष्ट क्षेत्र बन जाते हैं, क्योंकि उनके आसपास बनने वाले हाइड्रोलाइज्ड उत्पाद आयोडीन के साथ गहरे नीले रंग का निर्माण नहीं करते हैं। दूसरी ओर, प्लेटों के बाकी क्षेत्र गहरे नीले रंग के हो जाते हैं, क्योंकि आयोडीन इन क्षेत्रों में निर्जलित स्टार्च के साथ गहरे नीले रंग बनाता है।

सामग्री की आवश्यकता:

पेट्री डिश, शंक्वाकार फ्लास्क, कॉटन प्लग, इनोक्युलेटिंग लूप, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लैमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, स्टार्च एगर, लुगोल के आयोडीन सॉल्यूशन, पृथक कोलोन या बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियां।

प्रक्रिया:

1. दो पेट्री डिश को साफ किया जाता है, क्राफ्ट पेपर से ढका जाता है और धागे या रबर बैंड (चित्र 7.21) के साथ बांधा जाता है। यह कदम और साथ ही चरण 6 पर पेट्री डिश के नसबंदी को छोड़ दिया जाता है, अगर ओवन-निष्फल पेट्री डिश सीधे उपयोग किया जाता है।

2. स्टार्च एगर मीडियम (मुख्य घटक के रूप में स्टार्च युक्त) या इसके रेडीमेड पाउडर को मीडियम के 100 मिलीलीटर की आवश्यकता होती है, इसे 250 मिली शंक्वाकार फ्लास्क में 100 मिली और आसुत जल में हिलाकर और घोलकर तौला जाता है।

3. इसका पीएच एक पीएच पेपर या पीएच मीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है और अगर यह कम है तो 0.1N HCI का उपयोग करते हुए या 0.1N HCI का उपयोग करके 7.2 पर समायोजित किया जाता है।

4. पूरी तरह से मध्यम में अगर को भंग करने के लिए फ्लास्क को गरम किया जाता है।

5. फ्लास्क कपास-प्लग है, शिल्प कागज के साथ कवर किया गया है और धागे या रबर बैंड के साथ बांधा गया है।

6. आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए दो पेट्री डिश और स्टार्च एगर माध्यम युक्त शंक्वाकार फ्लास्क को 121 ° C (15 psi दबाव) पर निष्फल किया जाता है।

7. नसबंदी के बाद, उन्हें आटोक्लेव से हटा दिया जाता है और कुछ समय के लिए ठंडा करने की अनुमति दी जाती है, माध्यम को जमने की अनुमति के बिना। माध्यम के ठंडा होने से प्लेटों के अंदर पानी की बूंदों के संघनन और संचय को रोकता है। यदि माध्यम पहले से ही तैयार किया गया है और भंडारण के दौरान जम गया है, तो इसे पूरी तरह से पिघलने तक सावधानी से गर्म करके तरलीकृत करना होगा।

8. स्टार्च अगर प्लेटों को तैयार करने से पहले, निष्फल स्टार्च एगर मीडियम ठंडा होने और जमने से पहले, गर्म पिघली हुई अवस्था में, इसे असमान रूप से डाला जाता है, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष के अंदर, दो निष्फल पेट्री डिश (लगभग 20 मिलीलीटर प्रत्येक) में, ताकि पिघला हुआ माध्यम पेट्री डिश के निचले हिस्से को पूरी तरह से कवर करता है।

फिर, प्लेटों को उनके ढक्कन के साथ कवर किया जाता है और ठंडा करने की अनुमति दी जाती है, ताकि उनमें माध्यम को ठोस किया जा सके। लगभग 1 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक इनक्यूबेटर में एक औंधा स्थिति में प्लेटों और पलकों को रखने से प्लेटों और पलकों की आंतरिक सतह पर घनीभूत होने वाले जल वाष्प का वाष्पीकरण हो सकता है।

9. प्रत्येक प्लेट को नीचे की तरफ चार तिमाहियों में चिह्नित किया गया है।

9. टेस्ट बैक्टीरिया का "स्पॉट इनोक्यूलेशन" असमान रूप से, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष के अंदर किया जाता है, प्रत्येक तिमाही के केंद्र पर एक लौ-निष्फल लूप की मदद से बैक्टीरिया का एक स्पॉट (या छोटा धब्बा) बनाकर। लूप को प्रत्येक इनोक्यूलेशन के बाद निष्फल किया जाता है।

11. inoculated प्लेटों को औंधा स्थिति में ऊष्मायन किया जाता है, ऊपर से नीचे 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 से 48 घंटों के लिए एक इनक्यूबेटर में जब तक कि बैक्टीरिया की कॉलोनियां दिखाई नहीं देती हैं।

12. प्लेग लुगोल के आयोडीन घोल से भर जाते हैं।