बैक्टीरियल बीजाणु और वनस्पति कोशिका में अंतर करने के लिए बैक्टीरिया का बीजाणु धुंधला होना

उद्देश्य:

सभी जीवाणु अपने ative वानस्पतिक रूपों ’में बने रहते हैं, यदि पर्यावरण की स्थिति उनकी सामान्य चयापचय गतिविधियों के लिए अनुकूल होती है।

इस रूप में, वे पोषक तत्व लेते हैं, बढ़ते हैं और प्रजनन करते हैं।

दूसरी ओर, उनमें से ज्यादातर की मृत्यु हो जाती है, जब पर्यावरण की स्थिति प्रतिकूल हो जाती है, जैसे, गंभीर ठंड, अत्यधिक गर्मी, उम्र बढ़ने, पोषक तत्वों की कमी, विकिरण और विषाक्त रसायनों के संपर्क में।

हालांकि, बैक्टीरिया की कुछ प्रजातियां, ऐसे प्रतिकूल परिस्थितियों में खुद को अत्यधिक प्रतिरोधी, चयापचय रूप से निष्क्रिय रूपों में बदलकर जीवित रह सकती हैं जिन्हें 'बीजाणु' कहा जाता है। प्रतिकूल परिस्थितियों में, एक बीजाणु एक वनस्पति कोशिका के भीतर निर्जलीकरण और इसकी कोशिका सामग्री के संकुचन द्वारा उत्पन्न होता है।

बैक्टीरिया कोशिका के अंदर बनने वाले इस बीजाणु को 'एंडोस्पोर' (चित्रा 2.13) कहा जाता है। यदि प्रतिकूल स्थितियां बिगड़ती हैं, तो कोशिका टूट जाती है, जो एन्डोस्पोर को छोड़ देती है, जो अब 'डोर' नामक एक स्वतंत्र निष्क्रिय कोशिका बन जाती है।

बीजाणु निर्माण की प्रक्रिया को 'स्पोरोजेनेसिस' कहा जाता है। बीजाणु में मोटी, अपेक्षाकृत अभेद्य परतें होती हैं, जैसे बीजाणु प्रांतस्था और बीजाणु कोट, जो किसी भी शारीरिक क्षति से सेल की रक्षा करते हैं। बीजाणु कई तंत्रों द्वारा अपना प्रतिरोध हासिल करता है, जिसे अभी तक स्पष्ट रूप से समझाया नहीं गया है।

जब परिस्थितियां अनुकूल हो जाती हैं, तो बीजाणु को ढंकने वाली परतें और बीजाणु एक सक्रिय रूप से सक्रिय वनस्पति कोशिका को जन्म देते हैं। इस प्रक्रिया को 'अंकुरण' कहा जाता है।

इस प्रकार, बीजाणु बनाने की क्षमता के आधार पर, बैक्टीरिया को दो समूहों में विभाजित किया जा सकता है:

(1) बीजाणु-गठन बैक्टीरिया (बीजाणु-सूत्र):

एक बैक्टीरिया, जो प्रतिकूल पर्यावरणीय परिस्थितियों में जीवित रहने के लिए एक बीजाणु पैदा कर सकता है, एक बीजाणु-गठन बैक्टीरिया (बीजाणु-पूर्व) है। अधिकतर, रॉड के आकार के जीवाणुओं के निम्नलिखित तीन जनन प्रतिकूल पर्यावरणीय परिस्थितियों में बीजाणु पैदा कर सकते हैं।

A. एरोबिक रॉड के आकार का बैक्टीरिया

1. बेसिलस एसपीपी।

B. अवायवीय रॉड के आकार का बैक्टीरिया

2. क्लोस्ट्रीडियम एसपीपी।

3. डेसल्फोटोमैकुलम एसपीपी।

(2) गैर-बीजाणु-गठन बैक्टीरिया (गैर-बीजाणु-सूत्र):

एक जीवाणु, जो एक बीजाणु का उत्पादन नहीं कर सकता है और इसलिए, प्रतिकूल पर्यावरणीय परिस्थितियों में अपने वानस्पतिक रूप में मर जाता है, एक गैर-बीजाणु-गठन बैक्टीरिया (गैर-बीजाणु-पूर्व) है।

बीजाणु धुंधला करने का उद्देश्य बीजाणु-पूर्व के बीजाणु और वनस्पति कोशिकाओं को अलग करना और गैर-बीजाणु-फार्मर्स से बीजाणु-सूत्र को अलग करना है। बीजाणु जनन बेसिलस, क्लोस्ट्रीडियम और डेसल्फोटोमैकेम से संबंधित जीवाणुओं की पहचान करने में बीजाणु धुंधला भी मददगार है।

सिद्धांत:

बीजाणु वनस्पति कोशिकाओं से भिन्न होते हैं, जिसमें वे अपने आसपास मोटी, अपेक्षाकृत अभेद्य परतें (चित्रा 2.14) रखते हैं। प्राथमिक दाग, मैलाकाइट ग्रीन, इन परतों के माध्यम से बीजाणुओं में प्रवेश नहीं कर सकता है।

इसलिए, प्राथमिक दाग की पैठ गर्मी के आवेदन से संवर्धित होती है, जो इसे कवर परतों के माध्यम से बीजाणु प्रोटोप्लास्ट में ले जाती है। अब, बीजाणु हरे दिखाई देते हैं। जब बीजाणुओं को डिकोलराइजिंग एजेंट के साथ इलाज किया जाता है, तो पानी को टैप करें, वे डिकोलोरिसाइजेशन से नहीं गुजरते हैं, क्योंकि वे पानी को बाहर करते हैं।

नल का पानी बीजाणुओं के आस-पास मौजूद अतिरिक्त प्राथमिक दाग को हटाता है। इस प्रकार, बीजाणु हरे रंग को बनाए रखते हैं। इसके बाद, जब सेफ्रेनिन के साथ काउंटर-स्टैन किया जाता है, तो कवर परतों के माध्यम से सफारी के अणु बीजाणुओं में प्रवेश नहीं कर सकते हैं। इस प्रकार, अंत में बीजाणु प्राथमिक दाग के हरे रंग को बरकरार रखते हैं और हरे रंग के दिखाई देते हैं।

दूसरी ओर, वनस्पति बैक्टीरिया कोशिकाएं प्राथमिक दाग, मैलाकाइट हरे, आसानी से उठाती हैं, लेकिन दाग में वनस्पति कोशिका घटकों के लिए मजबूत आत्मीयता नहीं होती है, जिसके कारण नल के पानी के नीचे विघटित होने पर इसे धो दिया जाता है।

अब, वनस्पति कोशिकाएं रंगहीन दिखाई देती हैं। जब सफ़रनिन के साथ जवाबी दाग होते हैं, तो रंगहीन वनस्पति कोशिकाएं दाग को उठाती हैं और बीजाणुओं के विपरीत लाल दिखाई देती हैं, जो हरे रंग की दिखाई देती हैं।

सामग्री की आवश्यकता:

स्लाइड, लूप, मैलाकाइट ग्रीन, सफारीन, बीजाणु बनाने वाले बैक्टीरिया, गर्म प्लेट, माइक्रोस्कोप, विसर्जन तेल।

प्रक्रिया:

1. नल के पानी के नीचे एक स्लाइड को अच्छी तरह से साफ किया जाता है, जैसे कि पानी उसकी सतह पर बूंदों के रूप में नहीं रहता है।

2. पालन करने वाले पानी को बिबुलस पेपर से मिटा दिया जाता है और स्लाइड को हवा में सुखाया जाता है।

3. बीजाणु-गठन बैक्टीरिया का एक स्मीयर स्लाइड के केंद्र में दो तरीकों से बनाया गया है जैसा कि नीचे दिया गया है।

(ए) अगर अग्र-प्लेट या अगर तिरछा हो जाने पर बीजाणु-पूर्व को देखा जाना चाहिए, तो पानी की एक बूंद स्लाइड के केंद्र में रखी जाती है। एक लूप को लौ पर निष्फल कर दिया जाता है और बीजाणु-पूर्व की एक वृद्ध प्लेट या तिरछी संस्कृति (48-72 घंटे पुरानी) से बैक्टीरिया का क्लोस्ट्रीडियम लूप, जैसे क्लोस्ट्रीडियम सुपरजेन या बैसिलस सबटिलिस को पानी की बूंद में स्थानांतरित किया जाता है।

फिर, पानी की बूंद में लूप के कोमल घुमाव द्वारा, एक बैक्टीरिया निलंबन बनाया जाता है और एक धब्बा प्राप्त होने तक बूंद फैल जाती है। जैसे ही प्लेट या तिरछी संस्कृतियों पर बीजाणु बनाने वाले बैक्टीरिया की उम्र बढ़ती है, वे बीजाणु बनाते हैं।

(ख) यदि तरल शोरबा में उगने वाले बीजाणु-पूर्व को देखा जाए, तो ब्रोथ कल्चर, जिसमें केवल वनस्पति कोशिकाएँ होती हैं, को 15 मिनट के लिए पानी के स्नान पर गर्म करके, तनावपूर्ण तनाव के अधीन किया जाता है, ताकि कुछ वनस्पति कोशिकाएँ बीजाणुओं को दूर करने के लिए बन सकें। उष्मागत तनाव। शोरबा संस्कृति से मिश्रित बीजाणु-वनस्पति सेल निलंबन की एक बूंद को सीधे बाँझ लूप द्वारा स्लाइड के केंद्र में रखा जाता है और एक स्मीयर फैलाकर बनाया जाता है।

4. स्मीयर हवा से सुखाया जाता है।

5. स्मीयर को गर्म करके तय किया जाता है। सेल्युलर प्रोटीन के जमाव के कारण हीटिंग का परिणाम होता है, जिसके कारण कोशिकाएँ स्लाइड की सतह से चिपक जाती हैं और धुंधला होने के दौरान धुल नहीं जाती हैं, हीट-फिक्सेशन को 2-3 बार एक लौ के ऊपर उच्चतर रूप से स्मीयर के साथ पास करके किया जाता है। सतह ऊपर की ओर है, ताकि धब्बा गर्म न हो जाए।

6. धब्बा प्राथमिक दाग, मैलाकाइट हरे रंग से भरा होता है।

7. स्लाइड को गर्म गर्म प्लेट पर रखा जाता है और तैयारी को 2-3 मिनट तक भाप देने की अनुमति मिलती है। गर्म प्लेट का तापमान इतना समायोजित किया जाता है कि, तैयारी उबलती नहीं है और जल्दी से वाष्पित हो जाती है। वाष्पीकरण हानि को फिर से भरना है, ताकि धब्बा सूख न जाए।

8. स्लाइड को गर्म प्लेट से हटा दिया जाता है और ठंडा किया जाता है।

9. धीरे से बहने वाले नल के पानी के नीचे धोने से स्मीयर को विघटित कर दिया जाता है, ऐसे में पानी सीधे स्मीयर पर नहीं गिरता है।

10. स्मीयर 30 सेकंड के लिए काउंटर-स्टेन, सफारी, के साथ भर गया है।

11. अतिरिक्त काउंटर-दाग धीरे से बहने वाले नल के पानी के नीचे धब्बा से पूरी तरह से धोया जाता है, इस तरह से, पानी सीधे धब्बा पर नहीं गिरता है।

12. स्लाइड को बिबुलस पेपर के साथ सुखाया जाता है।

13. स्लाइड को माइक्रोस्कोप के चरण तक ले जाया जाता है और स्मीयर कम शक्ति और उच्च शुष्क उद्देश्यों के तहत मनाया जाता है।

14. विसर्जन तेल की एक बूंद धब्बा पर डाली जाती है।

15. धब्बा तेल-विसर्जन उद्देश्य के तहत मनाया जाता है।