ग्लूकोज (चित्रा के साथ) का उपयोग करने की उनकी क्षमता का पता लगाने के लिए बैक्टीरिया पर ऑक्सीकरण-किण्वन परीक्षण
बैक्टीरिया पर ऑक्सीकरण-किण्वन परीक्षण ग्लूकोज एरोबिक (ऑक्सीडेटिव) या anaerobically (किण्विक रूप से) का उपयोग करने की उनकी क्षमता का पता लगाने के लिए!
सिद्धांत:
कुछ बैक्टीरिया में ग्लूकोज का उपयोग करने की क्षमता होती है। उनमें से कुछ केवल ऑक्सीजन की उपस्थिति में इसका उपयोग करते हैं (बैल datively या एरोबिक रूप से), जबकि अन्य, एरोबिक रूप से उपयोग करने के अलावा, ऑक्सीजन की अनुपस्थिति में भी इसका उपयोग कर सकते हैं (fermentatively या anaerobically)।
इस प्रकार, एक बैक्टीरिया, जो ग्लूकोज को किण्वित करने में सक्षम होता है, उसे ऑक्सीकरण करने में सक्षम होना चाहिए, लेकिन ग्लूकोज को ऑक्सीकरण करने में सक्षम एक बैक्टीरिया इसे किण्वित नहीं कर सकता है। यदि ग्लूकोज का उपयोग किसी भी तरह से किया जाता है, तो एसिड का उत्पादन होता है, जो कि ब्रोमोकेरसोल बैंगनी के रंग को बैंगनी से पीले रंग में बदल देता है।
ऑक्सीकरण-किण्वन परीक्षण (ओ / एफ टेस्ट) में, ग्लूकोज और ब्रोमोकेरसोल बैंगनी से युक्त सेमीसॉलिड अगर ट्यूबों में, टेस्ट बैक्टीरिया को एरोबिक और एनारोबिक रूप से अलग-अलग उगाया जाता है। यदि बैक्टीरिया में ग्लूकोज का उपयोग करने की क्षमता है, तो माध्यम का रंग बैंगनी से पीले रंग में बदल जाता है। यदि यह ग्लूकोज को एरोबिक रूप से उपयोग करता है, तो यह ऑक्सीडेटिव है और यदि यह ग्लूकोज को एनारोबिक रूप से उपयोग करता है, तो यह किण्वक है।
सामग्री की आवश्यकता:
टेस्ट ट्यूब, शंक्वाकार फ्लास्क, कॉटन प्लग, इनोक्युलेटिंग लूप, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लैमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, ह्यू-लीफ-बेटा ग्लूकोज शोरबा, तरल पैराफिन, पृथक कालोनियों या बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों।
प्रक्रिया:
1. Hugh-Leifson ग्लूकोज शोरबा माध्यम (HLGB) (मुख्य घटक के रूप में ग्लूकोज और ब्रोमोकेरसोल बैंगनी युक्त) या इसके तैयार किए गए पाउडर की 100 मिलीलीटर शोरबा के लिए आवश्यक सामग्री को 100 मिलीलीटर आसुत जल में तौला और भंग किया जाता है। झटकों और घूमता द्वारा 250 मिलीलीटर शंक्वाकार फ्लास्क (चित्र। 7.9)।
2. इसका पीएच एक पीएच पेपर या पीएच मीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है और 0.1N HCI का उपयोग करके 7.4 से समायोजित किया जाता है यदि यह कम है या 0.1N NaOH का उपयोग कर रहा है यदि यह कम है।
3. पीएच को समायोजित करने के बाद, अगर को जोड़ा जाता है। कम एगर का उपयोग यहां एक अर्धचालक माध्यम प्राप्त करने के लिए किया जाता है, ताकि स्टैब को सुविधाजनक बनाया जा सके।
4. पूरी तरह से मध्यम में अगर को भंग करने के लिए फ्लास्क को गरम किया जाता है।
5. इससे पहले कि यह जम जाए, गर्म पिघली हुई स्थिति में माध्यम को टेस्ट ट्यूब के दो सेट (लगभग 5 मिलीलीटर प्रत्येक) में वितरित किया जाता है; प्रत्येक सेट में पांच टेस्ट ट्यूब होते हैं।
6. परखनली सूती-प्लग वाली होती हैं, जिन्हें क्राफ्ट पेपर से ढका जाता है और धागे या रबर बैंड से बांधा जाता है।
7. शोरबा ट्यूबों को आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस (15 साई दबाव) पर निष्फल किया जाता है।
8. शोरबा ट्यूबों को कमरे के तापमान तक ठंडा करने की अनुमति है।
9. तरल पैराफिन को 180 डिग्री सेल्सियस पर गर्म हवा के ओवन में 3 घंटे तक गर्म करके निष्फल किया जाता है।
10. परीक्षण बैक्टीरिया को असमान रूप से, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष में, सभी जीवाणुरहित अर्धविराम शोरबा ट्यूबों में एक लौ-निष्फल इनोक्युलेटिंग लूप की मदद से छुरा घोंपा जाता है। लूप को प्रत्येक इनोक्यूलेशन के बाद निष्फल किया जाता है।
11. निष्फल तरल पैराफिन को अवायवीय स्थितियों को प्रदान करने के लिए धीरे-धीरे एक सेट inoculated ट्यूबों, (मध्यम पर लगभग 1 सेमी ऊंचा) में असमान रूप से डाला जाता है।
12. एक इनक्यूबेटर में 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर सभी इनोकेटेड शोरबा ट्यूब ऊष्मायन किए जाते हैं।
टिप्पणियों:
दोनों ट्यूबों में बैंगनी से पीले रंग में रंग बदलता है: किण्वक।
केवल पैराफिन के बिना ट्यूबों में रंग बदलता है: ऑक्सीडेटिव।
किसी भी ट्यूब में कोई रंग परिवर्तन नहीं: बैक्टीरिया ग्लूकोज का उपयोग नहीं कर सकता है।
