बैक्टीरिया पर ऑक्सीडेज टेस्ट ऑक्सिडाइज कम करने के लिए उनकी क्षमता का पता लगाने के लिए साइकोक्रोम सी

बैक्टीरिया को ऑक्सीडाइज कम करने के लिए उनकी क्षमता का पता लगाने के लिए बैक्टीरिया पर ऑक्सीडेज टेस्ट के बारे में जानने के लिए यह लेख पढ़ें:

सिद्धांत:

कुछ बैक्टीरिया अपनी कोशिकाओं में मौजूद cy घटे हुए साइटोक्रोम सी ’को the ऑक्सीडाइज्ड साइटोक्रोम सी’ करने की क्षमता रखते हैं, क्योंकि वे एंजाइम to साइटोक्रोम ऑक्सीडेज ’का उत्पादन कर सकते हैं।

ऑक्सीकृत साइटोक्रोम C डाई N-tetramethyl-para-phenylenediamine (यानी ऑक्सीडेज अभिकर्मक) के साथ बैंगनी रंग (Wurster का बैंगनी) पैदा करता है।

ऑक्सीडेज परीक्षण में, पोषक तत्वों की आगर प्लेटें जिनमें परीक्षण बैक्टीरिया के उपनिवेश होते हैं, ऑक्सीडेज अभिकर्मक के घोल से भर जाती हैं। यदि बैक्टीरिया एंजाइम साइटोक्रोम ऑक्सीडेज का उत्पादन करने की क्षमता रखते हैं, तो प्लेटों पर उपनिवेशों का रंग बैंगनी में बदल जाता है। यदि बैक्टीरिया में साइटोक्रोम ऑक्सीडेज का उत्पादन करने की क्षमता नहीं है, तो कॉलोनियां ऑक्सीडेज अभिकर्मक के मूल गुलाबी रंग को बरकरार रखती हैं।

सामग्री की आवश्यकता:

पेट्री डिश, शंक्वाकार फ्लास्क, कॉटन प्लग, प्लेटिनम वायर इनोकॉलिंग लूप, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लैमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, व्हामन फिल्टर पेपर स्ट्रिप, ऑक्सीडेज रीजेंट (एन-टेट्रामेथाइल-पैरा-फेनिलिडेनमाइन) पोषक तत्व अगर, पृथक कालोनियों या बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों।

प्रक्रिया:

(ए) प्लेट विधि:

1. दो पेट्री डिश को साफ किया जाता है, क्राफ्ट पेपर से ढका जाता है और धागे या रबर बैंड (चित्रा 7.19) के साथ बांधा जाता है। इन चरणों के साथ-साथ चरण 6 पर पेट्री डिश के नसबंदी को छोड़ दिया जाता है, अगर ओवन-निष्फल पेट्री डिश सीधे उपयोग किया जाता है।

2. पोषक तत्व अगर मध्यम या 100 मिलीलीटर माध्यम के लिए आवश्यक इसके तैयार पाउडर के अवयवों को 250 मिलीलीटर शंकुधारी फ्लास्क में 100 मिलीलीटर आसुत जल में मिलाया जाता है और हिलाया जाता है।

3. इसका पीएच एक पीएच पेपर या पीएच मीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है और 0.1N HCI का उपयोग करके 7.0 से समायोजित किया जाता है यदि यह कम है या 0.1N NaOH का उपयोग कर रहा है यदि यह कम है।

4. पूरी तरह से मध्यम में अगर को भंग करने के लिए फ्लास्क को गरम किया जाता है।

5. फ्लास्क कपास-प्लग है, शिल्प कागज के साथ कवर किया गया है और धागे या रबर बैंड के साथ बांधा गया है।

6. दो पेट्री डिश और पोषक आगर मध्यम युक्त शंक्वाकार फ्लास्क एक आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस (15 साई दबाव) पर निष्फल होते हैं।

7. नसबंदी के बाद, उन्हें आटोक्लेव से हटा दिया जाता है और कुछ समय के लिए ठंडा करने की अनुमति दी जाती है, माध्यम को जमने की अनुमति के बिना। माध्यम के ठंडा होने से प्लेटों के अंदर पानी की बूंदों के संघनन और संचय को रोकता है। यदि माध्यम पहले से ही तैयार किया गया है और भंडारण के दौरान जम गया है, तो इसे पूरी तरह से पिघलने तक सावधानी से गर्म करके तरलीकृत करना होगा।

8. पोषक तत्व अगर प्लेटों को तैयार करने के लिए, निष्फल पोषक तत्व अगर मध्यम ठंडा होने से पहले और ठोस पिघला देता है, गर्म पिघली हुई अवस्था में, इसे असमान रूप से डाला जाता है, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष के अंदर, दो निष्फल पेट्री डिश (लगभग 20 मिलीलीटर प्रत्येक) में, ताकि पिघला हुआ माध्यम पेट्री डिश के निचले हिस्से को पूरी तरह से कवर करता है।

फिर, प्लेटों को उनके ढक्कन के साथ कवर किया जाता है और ठंडा करने की अनुमति दी जाती है, ताकि उनमें माध्यम को ठोस किया जा सके। लगभग 1 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक इनक्यूबेटर में औंधा स्थिति में प्लेटों और पलकों को रखने से प्लेटों और पलकों की आंतरिक सतह पर घनीभूत होने वाले जल वाष्प का वाष्पीकरण हो सकता है।

9. प्रत्येक प्लेट को नीचे की तरफ चार तिमाहियों में चिह्नित किया गया है।

9. टेस्ट बैक्टीरिया का "स्पॉट इनोक्यूलेशन" असमान रूप से किया जाता है, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष में, प्रत्येक तिमाही के केंद्र में एक लौ-स्टरलाइज़ लूप की मदद से बैक्टीरिया का एक स्पॉट (या छोटा धब्बा) बनाकर। लूप को प्रत्येक इनोक्यूलेशन के बाद निष्फल किया जाता है।

11. जीवाणुरहित प्लेटों को औंधा स्थिति में ऊपर से नीचे उकेरा जाता है, इनक्यूबेटर में 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर बैक्टीरिया की कॉलोनियां दिखाई देती हैं।

12. प्लेटें ऑक्सीडेज अभिकर्मक से भर जाती हैं।

(बी) कागज विधि:

1. एक व्हाईमन फिल्टर पेपर स्ट्रिप, 1% ऑक्सीडेज अभिकर्मक में डूबा हुआ सूख जाता है और अंधेरे में रखा जाता है।

2. उपयोग करने से पहले, इसे सिक्त किया जाता है और एक प्लैटिनम वायर लूप की मदद से टेस्ट बैक्टीरिया के एक लूप को स्पॉट के रूप में डाला जाता है। निकम लूप अभिकर्मक को ऑक्सीकृत कर सकता है। इसलिए, प्लैटिनम लूप का उपयोग करना होगा।

3. स्पॉट 10 सेकंड के बाद मनाया जाता है।