ग्लूकोज (चित्रा के साथ) का उपयोग करने के लिए एक जीवाणु की क्षमता का पता लगाने के लिए मिथाइल रेड टेस्ट

अंत उत्पाद के रूप में एक स्थिर एसिड के उत्पादन के साथ ग्लूकोज का उपयोग करने के लिए बैक्टीरिया की क्षमता का पता लगाने के लिए मिथाइल रेड टेस्ट (एमआर टेस्ट) के बारे में जानने के लिए इस लेख को पढ़ें!

सिद्धांत:

कुछ बैक्टीरिया में ग्लूकोज का उपयोग करने और इसे स्थिर उत्पाद में बदलने की क्षमता होती है जैसे कि लैक्टिक एसिड, एसिटिक एसिड या फॉर्मिक एसिड अंतिम उत्पाद के रूप में।

ये बैक्टीरिया शुरू में ग्लूकोज को पाइरुविक एसिड से चयापचय करते हैं, जो आगे स्थिर एसिड का उत्पादन करने के लिए 'मिश्रित एसिड मार्ग' के माध्यम से चयापचय होता है।

उत्पादित एसिड का प्रकार प्रजातियों से प्रजातियों में भिन्न होता है और बैक्टीरिया में मौजूद विशिष्ट एंजाइमी पथों पर निर्भर करता है। उत्पादित एसिड में पीएच घटकर 4.5 या उससे नीचे हो जाता है, जो कि पीले से लाल रंग में मिथाइल लाल के रंग में बदलाव से संकेत मिलता है।

मिथाइल रेड टेस्ट (एमआर टेस्ट) में, टेस्ट बैक्टीरिया को ग्लूकोज युक्त शोरबा माध्यम में उगाया जाता है। यदि बैक्टीरिया में एक स्थिर एसिड के उत्पादन के साथ ग्लूकोज का उपयोग करने की क्षमता है, तो मिथाइल लाल का रंग पीले से लाल रंग में बदल जाता है, जब शोरबा संस्कृति में जोड़ा जाता है।

सामग्री की आवश्यकता:

टेस्ट ट्यूब, शंक्वाकार फ्लास्क, कॉटन प्लग, इनोक्युलेटिंग लूप, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लैमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, एमआर-वीपी ब्रोथ (मिथाइल रेड-वोग्स प्रॉसेसर वॉयलर या ग्लूकोज फॉस्फेट ब्रोथ), मिथाइल रेड सॉल्यूशन, आइसोलेटेड कॉलोनियां बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों।

प्रक्रिया:

1. MR-VP ब्रोथ मीडियम (मुख्य घटक के रूप में ग्लूकोज युक्त) या इसके रेडीमेड पाउडर को ब्रॉथ के 100 मिलीलीटर के लिए जरूरी तौला जाता है और इसे 250 मिली शंक्वाकार फ्लास्क में आसुत जल के 100 मिलीलीटर में भंग कर दिया जाता है घूर्णन की। MR-VP शोरबा को ग्लूकोज फॉस्फेट शोरबा (चित्र 7.4) भी कहा जाता है।

2. इसका पीएच एक पीएच पेपर या पीएच मीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है और यदि यह कम है तो 0.1N HCI का उपयोग कर 6.9 या समायोजित किया जाता है। कुप्पी को गर्म किया जाता है, यदि आवश्यक हो, तो सामग्री को पूरी तरह से भंग करने के लिए।

3. शोरबा को पांच परीक्षण ट्यूबों (लगभग 10 मिलीलीटर प्रत्येक), कपास-प्लग में बांटा गया है, शिल्प कागज के साथ कवर किया गया है और धागे या रबर बैंड के साथ बांधा गया है।

4. शोरबा ट्यूबों को आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस (15 साई दबाव) पर निष्फल किया जाता है।

5. शोरबा ट्यूबों को कमरे के तापमान तक ठंडा करने की अनुमति है।

6. परीक्षण बैक्टीरिया को असंगत रूप से टीका लगाया जाता है, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष में, बन्सेन लौ के ऊपर निष्फल लूप की मदद से शोरबा में। लूप को प्रत्येक इनोक्यूलेशन के बाद निष्फल किया जाता है।

एक इनक्यूबेटर में 24 से 48 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनोकेटेड शोरबा ट्यूबों को ऊष्मायन किया जाता है।

8. मिथाइल रेड (3-4 बूंदों) का अल्कोहलिक घोल प्रत्येक टेस्ट ट्यूब में गिराया जाता है।

टिप्पणियों:

1. लाल रंग का उत्पादन: एमआर पॉजिटिव (यानी बैक्टीरिया ने ग्लूकोज को एक स्थिर एसिड में बदल दिया है, जैसा कि मिथाइल रेड से पीले और लाल रंग में परिवर्तित होता है। यह मिश्रित एसिड किण्वन को दर्शाता है)।

2. लाल रंग का उत्पादन नहीं किया गया: एमआर निगेटिव (यानी माध्यम में ग्लूकोज को स्थिर एसिड में नहीं बदला गया है। यह ब्यूटाइलीन ग्लाइकोल किण्वक को दर्शाता है)।