बैक्टीरिया पर लिपिड हाइड्रोलिसिस टेस्ट हाइड्रोलाइज लिपिड्स (चित्रा के साथ) की उनकी क्षमता का पता लगाने के लिए

लिपिड हाइड्रोलिसिस परीक्षण के बारे में जानने के लिए इस लेख को पढ़ें, जिससे लिपिड (वसा) को निकालने के लिए बैक्टीरिया की क्षमता का पता लगाया जा सके!

सिद्धांत:

कुछ बैक्टीरिया ग्लिसरॉल और फैटी एसिड को लिपिड (वसा) को हाइड्रोलाइज करने की क्षमता रखते हैं, क्योंकि वे लिपोलाइटिक एंजाइम 'लिपेज' के अधिकारी हैं।

इन बैक्टीरिया को लिपोलाइटिक बैक्टीरिया कहा जाता है। जबकि लिपिड एक पायस बनाते हैं, जब अगर में छितरी हुई, अपारदर्शिता पैदा करते हैं, तो उनके हाइड्रोलाइज्ड अंत उत्पाद, ग्लिसरॉल और फैटी एसिड, अगरर के साथ ऐसा पायस नहीं बनाते हैं, जिसके लिए वे इस तरह की अपारदर्शिता पैदा नहीं करते हैं; बल्कि पारदर्शिता का उत्पादन करें।

लिपिड हाइड्रॉलिसिस परीक्षण में, टेस्ट बैक्टीरिया को लिपिड सब्सट्रेट के रूप में ट्रिगाइरिन युक्त अगर प्लेटों पर उगाया जाता है। जब एक अपारदर्शी माध्यम का निर्माण किया जाता है, तब ट्रिबाइरिन एक पायस बनाता है।

यदि बैक्टीरिया में लिपिड को हाइड्रोलाइज करने की क्षमता होती है, तो इसकी कालोनियों में घुलनशील ग्लिसरॉल और फैटी एसिड (ब्यूटिरिक एसिड) के आसपास के क्षेत्रों में मध्यम रूप से ट्राइवेनिन को हाइड्रोजनीकृत किया जाता है, जबकि प्लेटों के बाकी क्षेत्रों में अनहाइड्रोइडेड ट्राइवरिन होता है।

परिणामस्वरूप, उपनिवेशों के चारों ओर पारदर्शी स्पष्ट क्षेत्र बनते हैं, क्योंकि हाइड्रोलाइज्ड उत्पादों, ग्लिसरॉल और फैटी एसिड के रूप में, उनके चारों ओर गठित अगर अग्र के साथ पायस नहीं बनाते हैं। दूसरी ओर, प्लेटों के बाकी क्षेत्र अपारदर्शी रहते हैं, क्योंकि इन क्षेत्रों में निर्जलित ट्राइग्रेनिन अग्र के साथ एक पायस बनाता है।

सामग्री की आवश्यकता:

पेट्री डिश, शंक्वाकार फ्लास्क, कॉटन प्लग, इनोकुलेटिंग लूप, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लैमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, टेंजाइरिन अगर, पृथक कालोनियों या बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों।

प्रक्रिया:

1. दो पेट्री डिश को साफ किया जाता है, क्राफ्ट पेपर से ढका जाता है और धागे या रबर बैंड (चित्र 7.22) के साथ बांधा जाता है। इस चरण के साथ-साथ चरण 6 पर पेट्री डिश के नसबंदी को छोड़ दिया जाता है, अगर ओवन-निष्फल पेट्री डिश सीधे उपयोग किया जाता है।

2. टेंजेरिनिन एगार मीडियम (ट्राइग्रेनिन को छोड़कर, जो कि लिपिड घटक है) या इसके तैयार किए गए चूर्ण को मीडियम के 100 मिलीलीटर के लिए आवश्यक मात्रा में मिलाया जाता है और 250 मिलीलीटर आसवित फ्लास्क में 100 मिली आसुत जल में मिलाया जाता है। घूर्णन की।

3. इसका पीएच एक पीएच पेपर या पीएच मीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है और अगर यह कम है तो 0.1N HCI का उपयोग करते हुए या 0.1N HCI का उपयोग करके 7.2 पर समायोजित किया जाता है।

4. पूरी तरह से मध्यम में अगर को भंग करने के लिए फ्लास्क को गरम किया जाता है।

5. लगभग 90 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा होने के बाद, एक सहायक ब्लेंडर में ट्रिंजरिन मिलाया जाता है।

6. फ्लास्क कपास-प्लग है, शिल्प कागज के साथ कवर किया गया है और धागे या रबर बैंड के साथ बांधा गया है।

7. दो पेट्री डिश और कॉन्ट्रिकल फ्लास्क जिसमें ट्रिंजिरिन अगर माध्यम होता है, आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए 121 ° C (15 psi दबाव) पर निष्फल होता है।

8. नसबंदी के बाद, उन्हें आटोक्लेव से हटा दिया जाता है और कुछ समय के लिए ठंडा करने की अनुमति दी जाती है, माध्यम को जमने की अनुमति के बिना। माध्यम के ठंडा होने से प्लेटों के अंदर पानी की बूंदों के संघनन और संचय को रोकता है। यदि माध्यम पहले से ही तैयार किया गया है और भंडारण के दौरान जम गया है, तो इसे पूरी तरह से पिघलने तक सावधानी से गर्म करके तरलीकृत करना होगा।

9. टिरिंजिन अगर प्लेट्स को तैयार करने के लिए, गर्म पिघली हुई अवस्था में, निष्फल टेंजाइरिन अगर मीडियम को ठंडा करने और जमने से पहले, इसे असमान रूप से डाला जाता है, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष के अंदर, दो स्टेरिल पेट्री डिश (लगभग 20 मिलीलीटर प्रत्येक) में, ताकि पिघला हुआ माध्यम पेट्री डिश के निचले हिस्से को पूरी तरह से कवर करता है।

फिर, प्लेटों को उनके ढक्कन के साथ कवर किया जाता है और ठंडा करने की अनुमति दी जाती है, ताकि उनमें माध्यम को ठोस किया जा सके। जब एक अपारदर्शी माध्यम का निर्माण किया जाता है, तब ट्रिबाइरिन एक पायस बनाता है। लगभग 1 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक इनक्यूबेटर में औंधा स्थिति में प्लेटों और पलकों को रखने से प्लेटों और पलकों की आंतरिक सतह पर घनीभूत होने वाले जल वाष्प का वाष्पीकरण हो सकता है।

10. प्रत्येक प्लेट को नीचे की तरफ चार तिमाहियों में चिह्नित किया गया है।

टेस्ट बैक्टीरिया का "स्पॉट इनोक्यूलेशन" असमान रूप से किया जाता है, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष के अंदर, प्रत्येक तिमाही के केंद्र में एक लौ-निष्फल लूप की मदद से बैक्टीरिया का एक स्थान (या छोटा धब्बा) बनाकर। लूप को प्रत्येक इनोक्यूलेशन के बाद निष्फल किया जाता है।

12. जीवाणुरहित प्लेटों को औंधा स्थिति में ऊपर से नीचे उकेरा जाता है, 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 से 48 घंटों के लिए एक इनक्यूबेटर में बैक्टीरिया के कालोनियों के दिखाई देने तक।