सीटू संकरण (मछली) में फ्लोरोसेंट

इस लेख में हम सितु संकरण (मछली) में फ्लोरोसेंट के बारे में चर्चा करेंगे।

यह एक प्रयोगशाला तकनीक है जिसका उपयोग यह निर्धारित करने के लिए किया जाता है कि सेल में डीएनए के विशिष्ट खंड की कितनी प्रतियां मौजूद हैं। यह कोशिका संबंधी तैयारी में विशिष्ट गुणसूत्र क्षेत्र की पहचान करता है। लैब में, डीएनए के एक खंड को फ्लोरोसेंट डाई द्वारा रासायनिक रूप से संशोधित या दाग दिया जाता है और जब फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है तो यह बहुत चमकीले रंग का फ्लोरोसेंट दिखता है।

सीटू संकरण में प्रतिदीप्ति गुणसूत्र विश्लेषण की संवेदनशीलता, विशिष्टता और संकल्प में बहुत वृद्धि हुई है।

इस तकनीक के फायदे कई हैं लेकिन कुछ इस प्रकार हैं:

(1) इस पद्धति का संकल्प पारंपरिक गुणसूत्र बैंडिंग और लंबाई में लगभग 2 मेगा-बेस (एमबी) की तुलना में बहुत बेहतर है।

(2) इस तकनीक का प्रोटोकॉल आसान है और यह दोनों विभाजित कोशिकाओं के साथ-साथ गैर-विभाजित कोशिकाओं के लिए भी लागू है। यह तकनीक विलोपन, दोहराव, अनुप्रास और व्युत्पन्न गुणसूत्रों की उपस्थिति सहित उत्परिवर्तन की एक श्रृंखला की पहचान कर सकती है। इस तकनीक का उपयोग आमतौर पर अस्थि मज्जा प्रत्यारोपण रोगियों में आवर्तक या अवशिष्ट रोग की निगरानी के लिए भी किया जाता है।

फिश (फ्लोरसेंट इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन) आम तौर पर क्रोमोसोमल विश्लेषण और विशिष्ट अनुवादन और विलोपन दोनों की पहचान के लिए उत्तेजित परिधीय रक्त पर किया जाता है। उदाहरण के लिए, यह फिलाडेल्फिया गुणसूत्र (Ph ¹ ) को गुणसूत्र 9 और 22 के बीच के अनुवाद द्वारा निर्मित प्रदर्शित करने के लिए उपयोग किया जाता है और एक पुरानी माइलोजेनस ल्यूकेमिया (CML) का कारण बनता है।

इसका उपयोग गुणसूत्र 8 और 14 के बीच के ट्रांसलोकेशन की पहचान में किया जाता है जो बुर्किट के लिंफोमा का कारण बनता है और क्रोमोसोम 18 और 14 के बीच बी-सेल ल्यूकेमिया का परिणाम होता है। इसका उपयोग डाउन सिंड्रोम के निदान के लिए भी किया जाता है।

फिश प्रक्रिया में, सेल संस्कृतियों को तैयार किया जा सकता है। मेटाफ़ेज़ / प्रोमाटेफ़ेज़ गुणसूत्र एक ग्लास स्लाइड पर तय किए जाते हैं। इसके अलावा, फिश को इंटरफेज नाभिक के विश्लेषण के लिए संशोधित किया जा सकता है। फिर, गुणसूत्र विकृत होते हैं; एक लेबल डीएनए जांच फिर शुरू की जाती है और फिर स्लाइड पर गुणसूत्र को हाइब्रिड किया जाता है। इसलिए, शब्द 'सीटू' संकरण में दिया गया है।

डीएनए जांच को फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किया जाता है, इस तरह की जांच से फ्लोरोसेंट संकेत मिलता है और इसे प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के साथ देखा जा सकता है। फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप में संलग्न फिल्टर की मदद से प्रतिदीप्ति काटा जा सकता है।

फिश प्रोब लगभग 40 किलो बेस (केबी) की लंबाई के होते हैं, और एक गुणसूत्र जोड़ी के प्रत्येक सदस्य पर एक डबल फ्लोरोसेंट सिग्नल के रूप में पाए जाते हैं। डबल-डॉट दो संरेखित बहन क्रोमैटिड्स में से प्रत्येक के संकेतों से मेल खाती है।

इसके सरल अनुप्रयोग में, ऐसी किसी भी जांच के लिए एक सामान्य FISH पैटर्न डबल-डॉट्स के दो सेट होंगे, सामान्य रूप से युग्मित गुणसूत्रों के प्रत्येक सदस्य के लिए एक सेट। ये दोहरे बिंदु अक्सर एक संकेत बनाने के लिए फ्यूज हो जाते हैं। क्रोमोसोमल क्षेत्र के लिए सेल मोनोसोमिक, न्यूक्लियस में डबल-डॉट का केवल एक सेट दिखाएगा, जबकि ट्राइसोमिक सेल डबल-डॉट्स के तीन सेट दिखाएगा।