प्रयोग: बैक्टीरिया का मोटिवेशन टेस्ट: हैंगिंग ड्रॉप तैयारी के साथ (चित्रा के साथ)

एक बैक्टीरिया की गतिशीलता परीक्षण करने के लिए, ड्रॉप तैयारी लटकाकर, यह पता लगाने के लिए कि क्या यह मकसद या गैर-मकसद है।

उद्देश्य:

अभिप्रेरणा का अर्थ है अपनी शक्ति से आवागमन की क्षमता। गतिशीलता के आधार पर, बैक्टीरिया को दो समूहों में विभाजित किया जा सकता है।

(1) मोटाइल बैक्टीरिया:

एक बैक्टीरिया, जिसमें आसपास के माध्यम में आंदोलन की आंतरिक क्षमता होती है, जिसमें यह निलंबित रहता है, एक प्रेरक बैक्टीरिया है।

(2) गैर-प्रेरक जीवाणु:

एक बैक्टीरिया, जिसमें आसपास के माध्यम में आंदोलन की आंतरिक क्षमता नहीं होती है, जिसमें यह निलंबित रहता है, एक गैर-प्रेरक बैक्टीरिया है। गैर-प्रेरक बैक्टीरिया स्पष्ट गति दिखा सकता है, जिसके परिणामस्वरूप बैक्टीरिया कोशिकाओं पर आसपास के माध्यम में पानी के अणुओं की बमबारी के कारण उनका भूरापन होता है।

गीले माउंट में, हालांकि बैक्टीरिया के आकार और आकार को देखा जा सकता है, गतिशीलता में बाधा आ सकती है, क्योंकि स्लाइड और आवरण पर्ची के बीच निलंबन दबाया जाता है। इसीलिए; लटकने की तैयारी या गतिशीलता परीक्षण बैक्टीरिया की गतिशीलता के स्पष्ट अवलोकन के लिए, उनके आकार और आकार के अलावा किया जाता है। यह बैक्टीरिया की पहचान में उपयोगी है।

सिद्धांत:

जीवाणुओं के निलंबन की एक बहुत छोटी बूंद एक आवरण पर्ची के केंद्र से एक गुहा स्लाइड के गुहा में लटकाया जाता है। लटकती हुई बूंद को तेल-विसर्जन उद्देश्य का उपयोग करके एक माइक्रोस्कोप के तहत मनाया जाता है। यदि बैक्टीरिया मोटिव होते हैं, तो इसकी कोशिकाओं को आसपास के माध्यम में अनिश्चित गति के लिए देखा जा सकता है।

इसके विपरीत, यदि यह गैर-मकसद है, तो इसकी कोशिकाएं बिना किसी आंदोलन के माध्यम में स्थिर रहती हैं या बैक्टीरिया कोशिकाओं पर माध्यम में पानी के अणुओं द्वारा बमबारी के परिणामस्वरूप ब्राउनियन आंदोलन दिखा सकती हैं।

सामग्री की आवश्यकता:

कैविटी स्लाइड, कवर स्लिप, पेट्रोलियम जेली या वैसलीन, विसर्जन तेल, बैक्टीरिया, लूप और माइक्रोस्कोप (यौगिक, अंधेरे-क्षेत्र या चरण-विपरीत) की 24 घंटे पुरानी शोरबा संस्कृति।

प्रक्रिया:

1. नल के पानी के नीचे एक कैविटी स्लाइड को अच्छी तरह से साफ किया जाता है, जैसे कि पानी इसकी सतह पर बूंदों के रूप में नहीं रहता है। केंद्र में एक छोटी सी गोल अवसाद के साथ एक कैविटी स्लाइड एक ग्लास स्लाइड है, जिसमें बैक्टीरिया निलंबन की एक छोटी बूंद लटका सकती है (चित्र 5.3)।

2. स्लाइड को बिबुलस पेपर से पोंछकर और बाद में इसे आंच पर रखकर या धूप में रख कर सुखाया जाता है।

3. गुहा के चारों ओर पेट्रोलियम जेली (या वैसलीन) की एक अंगूठी लगाई जाती है।

4. एक लूप को लौ पर बाँझ कर ठंडा किया जाता है। 24 घंटे पुरानी शोरबा संस्कृति से बैक्टीरिया के निलंबन का एक बड़ा हिस्सा असमान रूप से लिया जाता है। निलंबन की एक छोटी बूंद को कवर स्लिप के केंद्र में रखा गया है। शोरबा की संस्कृति 24 घंटे से अधिक पुरानी नहीं होनी चाहिए, क्योंकि बैक्टीरिया बड़े होने के साथ अपनी गतिशीलता खो सकते हैं।

5. कैविटी स्लाइड को उल्टा करके कवर स्लिप पर रखा जाता है, ऐसे में कैविटी ड्रॉप को कवर करती है।

6. स्लाइड और कवर स्लिप को एक साथ धीरे से दबाया जाता है, ताकि कैविटी सील हो जाए। यह देखने के लिए ध्यान रखा जाना चाहिए कि गुहा का कोई भी हिस्सा बूंद को नहीं छूता है।

7. स्लाइड को जल्दी से उल्टा कर दिया जाता है, जैसे कि ड्रॉप बिना छुए गुहा में लटक जाती है।

8. स्लाइड को माइक्रोस्कोप के चरण में क्लिप किया जाता है।

9. ड्रॉप की धार कम बिजली के उद्देश्य के तहत केंद्रित है।

ड्रॉप के किनारे पर ध्यान केंद्रित करने के कारण निम्नानुसार हैं:

(ए) ड्रॉप के अपवर्तक सूचकांक और कवर स्लिप में अंतर के कारण बेहतर विपरीत प्राप्त होता है।

(b) जैसे ही ड्रॉप हैंग होता है, यह किनारे की ओर बढ़ता है, जिसके लिए बढ़त में गतिशीलता के लिए स्पष्ट रूप से देखे जाने वाले बैक्टीरिया की संख्या कम होती है।

(c) आमतौर पर एरोबिक बैक्टीरिया श्वसन के लिए अधिक ऑक्सीजन प्राप्त करने के लिए किनारे की ओर आते हैं, जिसके लिए उन्हें किनारे पर देखा जा सकता है।

10. विसर्जन तेल की एक बूंद को कवर स्लिप पर हैंगिंग ड्रॉप के ठीक ऊपर रखा जाता है और लटकने वाली बूंद के किनारे को माइक्रोस्कोप के तेल-विसर्जन उद्देश्य के तहत मनाया जाता है। अधिमानतः, स्पष्ट अवलोकन के लिए एक चरण-विपरीत या अंधेरे-क्षेत्र माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जाना चाहिए।

अवलोकन (तेल-विसर्जन उद्देश्य के तहत):

1. प्रेरणा:

मोटाइल या नॉन-मोटाइल

2. बैक्टीरिया का आकार:

गोलाकार (कोकस)

रॉड के आकार का (बेसिली)

कोमा जैसा (वाइब्रियो)

सर्पिल (स्पाइरोकेट्स)

3. बैक्टीरिया की व्यवस्था:

जोड़े (डिप्लोबैसिलस / डिप्लोकॉकस)

चौपायों (टेट्राड्स) में

जंजीरों में (स्ट्रेप्टोकोकस / स्ट्रेप्टोबैसिलस)

अंगूर की तरह गुच्छे (स्टेफिलोकोकस)

क्यूबॉइडल (सार्सिना या ऑक्टेट)।

4. बैक्टीरिया का आकार:

आंखों के आकलन से, तेल-विसर्जन उद्देश्य के तहत क्षेत्र की ड्राइंग बनाएं।

(3) धुंधला:

धुंधला का उद्देश्य:

बैक्टीरिया कोशिकाओं का अपवर्तक सूचकांक पानी के बहुत करीब होता है, जिसमें वे अवलोकन के दौरान निलंबित और कांच की स्लाइड के भी होते हैं, जिस पर वे माइक्रोस्कोप के नीचे देखे जाते हैं। इसलिए, उन्हें स्पष्ट रूप से निरीक्षण करना बहुत मुश्किल है।

इस कठिनाई को दूर करने के लिए, कोशिकाओं को दाग द्वारा रंगा जाता है, जो कोशिकाओं को गहरा रंग और आसपास के माध्यम को हल्के रंग प्रदान करता है, जिसमें वे निलंबित हैं। गहरे रंग की कोशिकाओं को हल्के रंग की पृष्ठभूमि के खिलाफ एक स्पष्ट विपरीत मिलता है और इसे स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है।

इस प्रकार, धुंधला हो जाना रंगहीन पारदर्शी सूक्ष्मजीवों को उनके जैविक अवलोकन के लिए 'दाग' नामक विभिन्न जैविक रंगों की मदद से रंग प्रदान करने की एक विधि है।

दाग की रसायन:

रंग एजेंट तीन प्रकार के होते हैं:

1. रंजक:

उनका उपयोग सामान्य प्रयोजन के रंग के लिए किया जाता है जैसे, कपड़ा सामग्री को रंगने के लिए और दीवारों को रंगने के लिए।

2. दाग:

उनका उपयोग जैविक या सूक्ष्मजीवविज्ञानी नमूने के रंग के लिए किया जाता है। ये अधिक सटीक और सटीक हैं।

3. संकेतक:

वे रसायन हैं, जो हाइड्रोजन आयन एकाग्रता (पीएच) में परिवर्तन के साथ रंग बदलते हैं।

हालांकि 'दाग' उपयुक्त शब्द है, 'डाई' शब्द का इस्तेमाल सूक्ष्म जीव विज्ञान में व्यापक रूप से रंग एजेंटों के लिए किया जाता है। अतीत में, विभिन्न पौधों से प्राकृतिक रंजक तैयार किए गए थे। उन्हें सिंथेटिक रंजक द्वारा व्यापक रूप से बदल दिया गया है।

जैसा कि पहले सिंथेटिक डाई को एनिलिन से तैयार किया गया था, सभी सिंथेटिक डाई को 'एनिलिन डाइ' कहा जाता है। हालाँकि, इनमें से अधिकांश रंजक अब कोल-टार से उत्पन्न होते हैं, जिसके लिए उन्हें अब 'कोल-टार डेज़' कहा जाता है। कोयला-टार डाईज़ बेंजीन डेरिवेटिव हैं। एक डाई अणु में नीचे दिए गए अनुसार तीन घटक (चित्र 5.4) शामिल हैं।

(ए) एक बेंजीन अंगूठी

(b) एक क्रोमोफोर समूह

(c) एक ऑक्सोक्रोम समूह

बेंजीन एक कार्बनिक रंगहीन विलायक है, जबकि क्रोमोफोर डाई का रंग घटक है। बेंजीन क्रोमोफोर के साथ मिलकर क्रोमोजेन (चित्रा 5.5) बनाता है। चूंकि क्रोमोजेन के पास संपत्ति को अलग करने के लिए नहीं है, इसलिए यह कोशिकाओं के साथ गठबंधन नहीं कर सकता है और आसानी से धोया जाता है।

जब क्रोमोजेन एक ऑक्सोक्रोम के साथ जुड़ता है, तो एक डाई या दाग बनता है। ऑक्सोक्रोम डाई में इलेक्ट्रोलाइटिक पृथक्करण संपत्ति (नमक बनाने वाली संपत्ति) प्रदान करता है। इस प्रकार, रासायनिक रूप से एक दाग को एक कार्बनिक यौगिक के रूप में परिभाषित किया जाता है जिसमें बेंजीन रिंग, एक क्रोमोफोर समूह और एक ऑक्सोक्रोम समूह होता है।

धुंधला के प्रकार:

नीचे वर्णित के अनुसार बैक्टीरिया का धुंधला होना विभिन्न प्रकार का है।

I. सरल धुंधला:

यहां, केवल एक दाग का उपयोग किया जाता है। इस धुंधला का उपयोग बैक्टीरिया के आकार (कोकोसी, बेसिली, वाइब्रियो, स्पिरिल्ली) और व्यवस्था (एकल, जोड़ी, टेट्रैड, चेन, क्लस्टर) का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है।

यह दो प्रकार का होता है:

ए। मूल धुंधला:

बुनियादी धुंधलापन में, एक मूल दाग, जैसे मिथाइलीन ब्लू, क्रिस्टल वायलेट या कार्बोल फुकसिन, का उपयोग बैक्टीरिया कोशिकाओं को दागने के लिए किया जाता है। दाग बैक्टीरिया की कोशिकाओं को कसकर बांधता है और दाग के गहरे रंग को कोशिकाओं तक पहुंचाता है, जबकि आसपास के माध्यम से दाग का हल्का रंग निकलता है।

बी अम्लीय धुंधला:

अम्लीय धुंधलापन में, एक अम्लीय दाग, जैसे ईओसिन या निग्रोसिन, का उपयोग बैक्टीरिया कोशिकाओं को नकारात्मक रूप से दागने के लिए किया जाता है। दाग आसपास के रंग को बनाता है, जबकि बैक्टीरिया कोशिका रंगहीन रहती है।

द्वितीय। विभेदक धुंधला:

यहां, एक से अधिक दागों का उपयोग किया जाता है। यह निम्नलिखित उद्देश्यों के लिए किया जाता है।

A. समूहों में पृथक्करण:

ये अंतर धुंधला तरीकों बैक्टीरिया को उनके धुंधला विशेषताओं के आधार पर विभिन्न समूहों में अंतर करने के लिए किया जाता है।

इन विधियों में निम्नलिखित शामिल हैं:

(ए) ग्राम स्टेनिंग:

यह धुंधला विधि ग्राम-पॉजिटिव और ग्राम-नेगेटिव बैक्टीरिया के बीच अंतर करने के लिए की जाती है।

(ख) एसिड-फास्ट धुंधला हो जाना:

यह एसिड-फास्ट और गैर-एसिड-फास्ट बैक्टीरिया के बीच अंतर करने के लिए किया जाता है।

ख। बैक्टीरिया की विशिष्ट संरचनाओं का दृश्य:

ये अंतर धुंधला हो जाना बैक्टीरिया कोशिकाओं के विशिष्ट संरचनात्मक घटकों की कल्पना करने के लिए किया जाता है।

इन विधियों में निम्नलिखित शामिल हैं:

(ए) बीजाणु धुंधला:

इस धुंधला विधि का उपयोग बीजाणु बनाने वाले बैक्टीरिया के एंडोस्पोर को दागने के लिए किया जाता है।

(ख) कैप्सूल धुंधला:

इस विधि का उपयोग कैप्सूल को दागने के लिए किया जाता है, जो कैप्सूलेटेड बैक्टीरिया को घेरता है।

(सी) फ्लैगेला धुंधला:

यह ध्वजांकित बैक्टीरिया के फ्लैगेला की कल्पना करने के लिए किया जाता है।

(घ) समावेश धुंधला:

यह धुंधला विधि बैक्टीरिया कोशिकाओं के सेल समावेशन को दागने के लिए किया जाता है, जैसे कि विलेटिन ग्रैन्यूल, ग्लाइकोजन ग्रैन्यूल और पीबीएच ग्रैन्यूल।