अज्ञात बैक्टीरिया की पहचान के लिए प्रयोग (चित्रा के साथ)
अज्ञात बैक्टीरिया की पहचान के लिए प्रयोग!
सिद्धांत:
अज्ञात जीवाणुओं की पहचान माइक्रोबायोलॉजिस्ट की प्रमुख जिम्मेदारियों में से एक है। दूषित सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति के लिए दुनिया भर की प्रयोगशालाओं में प्रतिदिन रक्त, ऊतक, भोजन, पानी और सौंदर्य प्रसाधनों के नमूनों की जांच की जाती है।
इसके अलावा, औद्योगिक संगठन नए एंटीबायोटिक-उत्पादन वाले रोगाणुओं या रोगाणुओं को अलग करने के लिए लगातार सामग्री की जांच कर रहे हैं, जो कि विटामिन, सॉल्वैंट्स और एंजाइम जैसे विपणन योग्य उत्पादों की उपज में वृद्धि करेंगे। एक बार पृथक होने के बाद, इन अज्ञात रोगाणुओं को पहचानना और वर्गीकृत करना होगा।
वर्गीकरण के विज्ञान को वर्गीकरण कहा जाता है और जीवित जीवों के परस्पर संबंधित समूहों में अलग होने से संबंधित है। 8 वीं संस्करण के बर्गीज़ मैनुअल ऑफ़ डिटरनेटिव बैक्टेरियोलॉजी, आधिकारिक टैक्सोनोमिक कुंजी है जिसमें सभी ज्ञात वर्गीकृत बैक्टीरिया (परिशिष्ट III) के आदेश, परिवार, पीढ़ी और प्रजातियां शामिल हैं।
धुंधला तरीकों, अलगाव तकनीकों, बैक्टीरिया पोषण, जैव रासायनिक गतिविधियों और बैक्टीरिया की वृद्धि विशेषताओं में मौलिक ज्ञान के साथ, यह किसी भी अज्ञात बैक्टीरिया की पहचान के लिए आसान हो जाता है।
कुछ बैक्टीरिया के लक्षण तालिका 7.2 में दिए गए हैं। प्रायोगिक प्रक्रियाओं के बाद प्राप्त टिप्पणियों और परिणामों के आधार पर अन्य जीवाणुओं को एक समान तरीके से पहचाना जा सकता है।
सामग्री की आवश्यकता:
स्लाइड्स, कैविटी स्लाइड्स, पेट्री डिश, शंक्वाकार फ्लास्क, कॉटन प्लग, इनोकुलेटिंग लूप, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लेमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, पोषक तत्व शोरबा, पोषक तत्व अगर, चना धुंधला अभिकर्मकों, मीडिया और जैव रासायनिक परीक्षणों के लिए अभिकर्मकों, यौगिक सूक्ष्मदर्शी।, पृथक कालोनियों या बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों।
प्रक्रिया:
1. अज्ञात बैक्टीरिया का ग्राम धुंधला प्रदर्शन किया जाता है। ग्राम धुंधला होने के अलावा, इसकी आकृति विज्ञान और व्यवस्था भी दर्ज की जाती है। बैक्टीरिया की मोटिवेशन टेस्ट हैंगिंग ड्रॉप तैयारी (चित्रा 7.25) द्वारा निर्धारित की जाती है।
2. बाँझ inoculating तकनीक का उपयोग, बैक्टीरिया दो पोषक तत्व अगर slants, एक पोषक तत्व शोरबा ट्यूब और एक पोषक तत्व अगर प्लेट में लकीर टीका द्वारा inoculated है। ऊष्मायन के बाद, अज्ञात बैक्टीरिया की सांस्कृतिक विशेषताओं को निर्धारित करने के लिए एक तिरछा संस्कृति का उपयोग किया जाता है।
दूसरे का उपयोग स्टॉक उप-संस्कृति के रूप में किया जाता है, क्या यह किसी भी परीक्षण को दोहराने के लिए आवश्यक होना चाहिए। विकास की विशेषताओं को शोरबा ट्यूब और कॉलोनी विशेषताओं में भी देखा जाता है।
3. बाँझ तकनीक में सावधानी बरतते हुए, ताकि संस्कृतियों को दूषित न किया जा सके और इस तरह के खतरनाक परिणाम प्राप्त किए जा सकें, विभिन्न जैव रासायनिक परीक्षणों को करने के लिए बैक्टीरिया को संबंधित मीडिया में निष्क्रिय कर दिया जाता है।
4. टीका मीडिया को आवश्यक लंबाई के लिए आवश्यक तापमान पर ऊष्मायन किया जाता है।
टिप्पणियों:
1. चना धुंधला में, चना प्रतिक्रिया के अलावा, बैक्टीरिया की आकृति विज्ञान और व्यवस्था भी दर्ज की जाती है।
2. पोषक तत्व शोरबा में बैक्टीरिया की सांस्कृतिक विशेषताओं, अगर तिरछा और पोषक तत्व अगर प्लेट पर ध्यान दिया जाता है।
3. जैव रासायनिक प्रतिक्रियाओं के परिणाम दर्ज किए जाते हैं।
परिणामों की व्याख्या:
1. उपरोक्त रिकॉर्ड किए गए डेटा का उपयोग करना (उदाहरण के लिए, तालिका 7.1 देखें) और बर्गी के मैनुअल ऑफ डिटरनेटिव बैक्टीरिया की मदद से, बैक्टीरिया को इसके जीनस और प्रजातियों के रूप में पहचाना जाता है। यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि, इस्तेमाल की जाने वाली प्रत्येक प्रजाति के उपभेदों के आधार पर परिणाम भिन्न हो सकते हैं और स्टॉक संस्कृति में बैक्टीरिया की लंबाई को बनाए रखा गया है।
देखे गए परिणाम अपेक्षित परिणामों के समान नहीं हो सकते हैं। इसलिए, बैक्टीरिया जो परिणामों को सबसे अच्छी तरह से फिट करता है उसे चुना जाता है। कुछ बैक्टीरिया की पहचान करने की विशेषताएं तालिका 7.2 में दी गई हैं।
2. वैकल्पिक रूप से, ऊपर दर्ज आंकड़ों का उपयोग करते हुए, रिकॉर्ड किए गए परिणामों (तालिका 7.3 देखें) के लिए कोड नंबर दिए गए हैं और ऐप्पल II, आईबीएम पीसी या टीआरएस -80 के लिए उपलब्ध कंप्यूटर प्रोग्राम की मदद से आसानी से पहचाने जाने वाले बैक्टीरिया।
कार्यक्रम को उपरोक्त टिप्पणियों के संबंध में अज्ञात बैक्टीरिया और ज्ञात बैक्टीरिया के बीच समानता के प्रतिशत के आधार पर अज्ञात जीवाणुओं की पहचान करने के लिए डिज़ाइन किया गया है।
Apple II या IBM-PC के लिए कार्यक्रम शुरू करने के लिए:
(a) डिस्क को लेफ्ट ड्राइव में डाला गया है।
(b) कंप्यूटर चालू है।
(c) प्रोग्राम के निर्देशों का पालन प्रतिक्रियाओं, अज्ञात बैक्टीरिया संख्या और कोड संख्याओं को टाइप करके किया जाता है, क्योंकि स्क्रीन पर प्रश्न दिखाई देते हैं।
TRS-80 के लिए कार्यक्रम शुरू करने के लिए:
(ए) कंप्यूटर चालू है।
(ख) डिस्क को नीचे ड्राइव में डाला गया है।
(सी) नारंगी का बटन दबाया जाता है।
(घ) पूछे जाने पर, "दिनांक (MM / DD / YY)" दर्ज किया जाता है।
(ई) ऑरेंज बटन को फिर से दबाया जाता है।
(f) प्रोग्राम निर्देशों को प्रतिक्रियाओं, अज्ञात जीवाणुओं की संख्या और कोड नंबरों को टाइप करके पीछा किया जाता है क्योंकि स्क्रीन पर प्रश्न दिखाई देते हैं।
ई। अज्ञात बैक्टीरिया की पहचान के स्वचालित तरीके:
धुंधला प्रतिक्रियाओं, गतिशीलता परीक्षण, सांस्कृतिक विशेषताओं और जैव रासायनिक परीक्षणों का उपयोग करके मैनुअल विधि द्वारा अज्ञात बैक्टीरिया की पहचान करना एक बोझिल, लंबा और समय लेने वाली प्रक्रिया है। प्रक्रिया को आसान और छोटा बनाने के लिए, स्वचालित तरीके विकसित किए गए हैं।
ये विधियां मूल रूप से जैव रासायनिक परीक्षणों का उपयोग करती हैं जैसा कि मैनुअल विधियों में किया जाता है, लेकिन यहां यह स्वचालित तरीके से किया जाता है और व्याख्या एक कंप्यूटर-सहायता कार्यक्रम के साथ की जाती है।
जीवाणुओं की स्वत: पहचान के लिए वर्तमान में उपयोग किए जाने वाले दो ऐसे सिस्टम निम्नानुसार दिए गए हैं:
1. मिनी एपीआई प्रणाली
2. VITEK 2 सिस्टम
एफ। आगे की पुष्टि:
(1) सीरोलॉजिकल टेस्ट:
पहचान किए गए जीवाणुओं की आगे की पुष्टि के लिए सीरोलॉजिकल परीक्षण किए जा सकते हैं। पहचाने गए जीवाणुओं के निलंबन (एक्स कहना) के लिए, उस बैक्टीरिया के खिलाफ एंटीसेरम (एंटी-एक्स) की एक बूंद मिश्रित होती है। यदि इसका परिणाम क्लैंप या प्रीसिपिटेट (एक्स-एंटी-एक्स कॉम्प्लेक्स) के रूप में होता है, तो पहचान की पुष्टि की जाती है।
विभिन्न जीवाणुओं के लिए एंटीसेरा व्यावसायिक रूप से उपलब्ध है। वे विभिन्न प्रयोगशालाओं में व्यावसायिक रूप से उत्पादित होते हैं। विशेष रूप से जीवाणुओं के एंटिसेरियम को उन जीवाणुओं की हत्या की गई या क्षीणन कोशिकाओं द्वारा (जिसे X कहा जाता है) एक प्रयोगशाला पशु में निर्मित किया जाता है।
एक रक्षा तंत्र के रूप में, मेजबान जानवर उस जीवाणु के खिलाफ एंटीबॉडी (एंटी-एक्स) का उत्पादन करता है, जो रक्त में रहता है। इस जानवर और उसके सीरम से रक्त को विशेष तकनीकों द्वारा अलग किया जाता है। इस सीरम में, उस बैक्टीरिया के खिलाफ एंटीबॉडी होते हैं, जिसे उस बैक्टीरिया का एंटिसर कहा जाता है।
(2) पीसीआर टेस्ट:
पॉलिमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) परीक्षण पहचान किए गए बैक्टीरिया की पुष्टि के लिए एक तेजी से आणविक विधि है। यह तकनीक बहुत जल्दी और ठीक से विभिन्न बैक्टीरिया और वायरस का पता लगाने के लिए उपयोग की जाती है।