विभिन्न अमीनो एसिड (चित्रा के साथ) Decarboxylate करने के लिए बैक्टीरिया की क्षमता का पता लगाने के लिए प्रयोग
विभिन्न अमीनो एसिड को डिकार्बोक्सिलेट करने के लिए बैक्टीरिया की क्षमता का पता लगाने के लिए प्रयोग!
सिद्धांत:
कुछ जीवाणुओं में अलग-अलग अमीनो एसिड्स को संबंधित एमाइनों और सीओ 2 में डिक्रॉक्सीलेट करने की क्षमता होती है क्योंकि वे संबंधित 'एमिनो एसिड डिकार्बोलाइज़ेस' एंजाइम का उत्पादन कर सकते हैं।
उनमें से, प्रत्येक बैक्टीरिया केवल अमीनो एसिड में से कुछ को डीकार्बोक्सिलेट कर सकता है, जबकि यह दूसरों को डीकार्बोक्सिलेट नहीं कर सकता है।
इस प्रकार, अमीनो एसिड, जो एक बैक्टीरिया डीकार्बोक्सिलेट कर सकते हैं और अमीनो एसिड, जो यह बैक्टीरिया की विशेषता नहीं है। अमीनो एसिड डीकार्बाक्सिलेस परीक्षण का परीक्षण करने के लिए किया जाता है, अलग से, एक बैक्टीरिया की क्षमता होती है जो C0 2 के उत्पादन के साथ लाइसिन, ऑर्निथिन और अरेंजीन जैसे डिकार्बोक्सिलेट एमिनो एसिड और डिग्वारेन, पुट्रेससीन और एगमाटाइन जैसे संबंधित एमाइन का उत्पादन करता है।
अगर बैक्टीरिया कर सकते हैं
किसी भी एक या एक से अधिक अमीनो एसिड को डीकार्बाक्सिलेट करें, संबंधित अमीन का उत्पादन होता है, जो क्षारीय (मूल) होते हैं और इसलिए, पीएच को ब्रोमोकेरसोल बैंगनी के रंग को पीले से बैंगनी में बदलते हैं।
अमीनो एसिड डीकार्बाक्सिलेस परीक्षण में, ग्लूकोज, ब्रोमोकेरसोल बैंगनी और अमीनो एसिड में से एक से युक्त शोरबा माध्यम में टेस्ट बैक्टीरिया को अवायवीय रूप से उगाया जाता है। ग्लूकोज के किण्वन द्वारा उत्पादित एसिड से पीएच में गिरावट के कारण शुरू में शोरबा का रंग बैंगनी से पीले रंग में बदल जाता है। यदि बैक्टीरिया में अमीनो एसिड को डीकार्बाक्सिलेट करने की क्षमता है, तो शोरबा का रंग पीले रंग से वापस बैंगनी में बदल जाता है।
सामग्री की आवश्यकता:
टेस्ट ट्यूब, शंक्वाकार फ्लास्क, कॉटन प्लग, इनोक्युलेटिंग लूप, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लैमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, एमिनो एसिड डिकरबॉक्साइलेज शोरबा, अमीनो एसिड (लिनाइन, ऑर्निथिन, आर्जिनिन), तरल पैराफिन, पृथक कालोनियों या शुद्ध संस्कृतियों बैक्टीरिया।
प्रक्रिया:
1. अमीनो एसिड डिकरबॉक्सलाइज़ ब्रोथ मीडियम (मुख्य घटक के रूप में ग्लूकोज और ब्रोमोकेरसोल बैंगनी युक्त) या इसके रेडीमेड पाउडर को 400 मिलीलीटर शोरबा के लिए आवश्यक होता है और 500 मिलीलीटर शंक्वाकार फ्लास्क में आसुत जल के 400 मिलीलीटर में तौला और भंग किया जाता है। झटकों और घूमता द्वारा (चित्रा 7.11)।
2. इसका पीएच एक पीएच पेपर या पीएच मीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है और यदि यह कम है, तो 0.1N HCI का उपयोग करते हुए इसे 0.1N HCI का उपयोग करके 7.2 पर समायोजित किया जाता है। कुप्पी को गर्म किया जाता है, यदि आवश्यक हो, तो सामग्री को पूरी तरह से भंग करने के लिए।
3. 400 मिलीलीटर शोरबा को चार 250 मिलीलीटर शंक्वाकार फ्लास्क में वितरित किया जाता है, ताकि प्रत्येक फ्लास्क में शोरबा के 100 मिलीलीटर हो।
4. इनमें से तीन फ्लास्क में, तीन अमीनो एसिड, जैसे, लाइसिन, ऑर्निथिन और आर्जिनिन को अलग-अलग (0.5 ग्राम प्रत्येक) में जोड़ा जाता है और एक को नियंत्रण के रूप में काम करने के लिए किसी भी एमिनो एसिड के बिना रखा जाता है। नियंत्रण का उपयोग परीक्षण माध्यम में दो-चरण के रंग परिवर्तनों के बीच भेद करने के लिए किया जाता है (अर्थात बैंगनी से पीले और पीले से बैंगनी तक)।
5. चार शंक्वाकार फ्लास्क में शोरबा को टेस्ट ट्यूब (लगभग 10 मिलीलीटर प्रत्येक) के चार अलग-अलग सेटों में वितरित किया जाता है, कपास-प्लग, शिल्प कागज के साथ कवर किया जाता है और धागे या रबर बैंड के साथ बांधा जाता है।
6. शोरबा ट्यूबों को आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस (15 साई दबाव) पर निष्फल किया जाता है।
7. शोरबा ट्यूबों को कमरे के तापमान तक ठंडा करने की अनुमति है।
8. तरल पैराफिन को गर्म हवा के ओवन में 3 घंटे के लिए 180 डिग्री सेल्सियस पर गर्म करके निष्फल किया जाता है।
9. परीक्षण बैक्टीरिया को असंगत रूप से टीका लगाया जाता है, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष में, बन्सेन लौ के ऊपर निष्फल लूप की मदद से शोरबा में। लूप को प्रत्येक इनोक्यूलेशन के बाद निष्फल किया जाता है।
10. निष्फल तरल पैराफिन को धीरे-धीरे inoculated ट्यूबों में डाला जाता है, (एनारोबिक रूप से लगभग 1 सेमी ऊंचा)।
11. inoculated शोरबा ट्यूब एक इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस पर incubated रहे हैं और परीक्षण सकारात्मक है या 4 दिनों की अधिकतम अवधि के लिए दैनिक मनाया जाता है।
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