मिश्रित चिकी अंडे (चित्रा के साथ) में पशु वायरस की खेती के लिए प्रयोग

भ्रूण चिकी अंडे में पशु वायरस की खेती के लिए प्रयोग!

सिद्धांत:

वायरस केवल जीवित प्रणालियों में विकसित हो सकते हैं। वे गैर-जीवित मीडिया में पोषक तत्व अगर या पोषक तत्व शोरबा में नहीं बढ़ सकते हैं। इसलिए, उनकी खेती को विशिष्ट वायरस के लिए अतिसंवेदनशील मेजबान कोशिकाओं की आवश्यकता होती है।

बैक्टीरियोफेज जैसे वायरस, जो बैक्टीरिया कोशिकाओं में संक्रमित और बढ़ते हैं, जीवित कोशिकाओं के रूप में बैक्टीरिया कोशिकाओं की संस्कृतियों का उपयोग करके खेती की जाती है।

उदाहरण के लिए, वायरस ई। कोलाई की संस्कृति का उपयोग करके वायरस कोलीफ़ेज (एक बैक्टीरियोफेज) की खेती की जाती है। इसके विपरीत, पशु वायरस, जो जानवरों के शरीर में संक्रमित और बढ़ते हैं, उन्हें अतिसंवेदनशील जीवित पशु प्रणालियों की आवश्यकता होती है।

प्रयोगशालाओं में जानवरों के विषाणुओं की खेती के लिए इस्तेमाल की जाने वाली तीन जीवित पशु प्रणालियाँ इस प्रकार हैं:

1. अतिसंवेदनशील पशु:

इस तकनीक में, जीवित रहने वाले वायरस जैसे माउस या गिनी पिग के शरीर में बढ़ने की अनुमति दी जाती है, जो उस वायरस के लिए अतिसंवेदनशील है। इस तकनीक का अब उपयोग नहीं किया जा रहा है इसे निम्नलिखित अधिक हालिया, कुशल और आर्थिक तकनीकों द्वारा प्रतिस्थापित किया गया है।

2. ऊतक संस्कृति:

यह एक अत्यंत परिष्कृत तकनीक है। यहां पशु कोशिकाओं को वायरस के लिए अतिसंवेदनशील होने के लिए जाना जाता है और यह भी तेजी से गुणा करने के लिए जाना जाता है कि पहले एक जानवर के उपयुक्त जीवित ऊतक से पृथक किया जाता है। इन कोशिकाओं को एक कांच या प्लास्टिक के बर्तन में रखा जाता है जिसमें एक अत्यंत समृद्ध पोषण माध्यम होता है। कोशिकाएं बर्तन की सतह से जुड़ी होती हैं और तब तक विभाजित होती रहती हैं जब तक कि पूरी सतह कोशिकाओं के एक संयुग्मित मोनोलेयर से आच्छादित न हो जाए। इसे टिशू कल्चर कहा जाता है।

फिर, संस्कारित होने वाले वायरस को अतिसंवेदनशील ऊतक संस्कृति में टीका लगाया जाता है। वायरस टिशू कल्चर की जीवित कोशिकाओं को संक्रमित करता है, उनके चयापचय तंत्र को विकृत करता है और तेजी से दोहराता है, जिससे कोशिकाओं में गहराई से वृद्धि होती है।

3. मिश्रित चिकी अंडे:

इस सरल और आर्थिक तकनीक में, संस्कारित होने वाले वायरस को एक भ्रूण वाले चिक अंडे में इंजेक्ट किया जाता है। वायरस जीवित मुर्गियों के अंडे के भीतर बढ़ता है और भ्रूण में बीमारी का कारण बनता है, उस वायरस के लिए विशिष्ट कई रोग लक्षणों (साइटोपैथोजेनिक प्रभाव) द्वारा प्रकट होता है। इन लक्षणों की उपस्थिति अंडे के भीतर उस वायरस की वृद्धि को इंगित करती है।

सामग्री की आवश्यकता:

दो भ्रूण वाले चूजे के अंडे, कैंडलिंग डिवाइस, टिंक्चर आयोडीन, शोषक कपास, 70% अल्कोहल, एक छोटी सी ड्रिल, 1: 2 न्यूकैसल वायरस, सिरिंज, स्टेराइल वैस्पर, स्टेराइल सलाइन, पेट्री डिश, बन्स बर्नर, लामिनेर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर।

प्रक्रिया:

1. भ्रूण की व्यवहार्यता को प्रदर्शित करने के लिए एक कैंडलिंग डिवाइस का उपयोग करके दो भ्रूण वाले चिक अंडे दिए जाते हैं। भ्रूण व्यवहार्य है, अगर यह प्रकाश से गर्मी के जवाब में गति दिखाता है। इसके अलावा हवा की थैली और बड़े रक्त वाहिकाओं की स्थिति को कैंडलिंग (चित्र 8.7) के दौरान अंडे के खोल पर निर्धारित और चिह्नित किया जाता है।

2. शेल को टिंचर आयोडीन के साथ हवा की थैली पर कीटाणुरहित किया जाता है और फिर सूखने की अनुमति दी जाती है। एक ही जगह 70% शराब के साथ लथपथ शोषक कपास के साथ swabbed है।

3. एक छोटी सी ड्रिल की नोक को 70% शराब में डुबो कर और फिर इसे ज्वलन करके निष्फल किया जाता है।

4. इस ड्रिल का उपयोग करते हुए, रक्त वाहिकाओं से दूर एक क्षेत्र में हवा की थैली पर खोल पर एक छोटा छेद बनाया जाता है।

5. न्यूकैसल वायरस के 1: 2 कमजोर पड़ने के 0.2 मिलीलीटर को एक निष्फल सिरिंज का उपयोग करके दो अंडों में से एक के अल्टानोइक गुहा में असमान रूप से इंजेक्ट किया जाता है। यह एक ऊर्ध्वाधर स्थिति में अंडे को पकड़कर किया जाता है, शेल पर छेद के माध्यम से सिरिंज की सुई को 45 डिग्री के कोण पर इसके झुकाव पर डाला जाता है, हवा की थैली झिल्ली को छेदता है और एलेंटोइक गुहा में घुसता है। यह वायरस- इनोकेटेड एग 'टेस्ट एग' का काम करता है।

6. इनोक्यूलेशन के बाद, सुई वापस ले ली जाती है और खोल पर छेद बाँझ गर्म वाष्प के साथ सील कर दिया जाता है।

7. एक ही तकनीक का उपयोग करते हुए, बाँझ खारा का 0.2 मिलीलीटर अन्य भ्रूणयुक्त चूजे के अंडे में डाला जाता है, जो 'नियंत्रण अंडे' के रूप में कार्य करता है।

8. दोनों अंडों को उचित आर्द्रता वाले इनक्यूबेटर में 3 से 4 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है।

9. अवलोकन हर दिन नोट किया जाता है।

10. एक बार मृत्यु निर्धारित हो जाने के बाद, भ्रूण को उसके खोल से अलग किया जाता है और सामग्री को पेट्री डिश में डाला जाता है और फिर से देखा जाता है।

11. सभी दूषित पदार्थों को ब्लीचिंग पाउडर वाले बीकर में छोड़ दिया जाता है।

टिप्पणियों:

1. अंडों को ऊष्मायन के दौरान हर रोज कैंडल किया जाता है और भ्रूण की मृत्यु के लिए मनाया जाता है, जो कि आंदोलन की समाप्ति के कारण होता है, जो आमतौर पर वायरस के टीकाकरण के 3 से 4 दिन बाद होता है।

2. एक बार मृत्यु निर्धारित हो जाने के बाद, भ्रूण को उसके खोल से अलग कर दिया जाता है और सामग्री पेट्री डिश में डाल दी जाती है। यह नेक्रोटिक घावों और रक्तस्राव के सबूत के लिए मनाया जाता है।

3. नियंत्रण अंडे को साइटोपैथोजेनिक प्रभावों के साक्ष्य के लिए जांच की जाती है।

4. सारणी 8.2 में दर्ज हैं।