क्लोनिंग वेक्टर्स, जीनोमिक और सीडीएनए लाइब्रेरी पर निबंध
क्लोनिंग क्षेत्र, जीनोमिक और सीडीएनए लाइब्रेरी के बारे में जानने के लिए इस निबंध को पढ़ें। इस निबंध को पढ़ने के बाद आप इसके बारे में जानेंगे: 1. क्लोनिंग वेक्टर का अर्थ 2. एक क्लोनिंग वेक्टर के लक्षण 3. सेक्टर के प्रकार 4. डीएनए लाइब्रेरी 5. सीडीएनए लाइब्रेरी।
सामग्री:
- क्लोनिंग वेक्टर के अर्थ पर निबंध
- एक क्लोनिंग वेक्टर की विशेषताओं पर निबंध
- वैक्टर के प्रकारों पर निबंध
- डीएनए लाइब्रेरी पर निबंध
- सीडीएनए लाइब्रेरी पर निबंध
निबंध # 1. क्लोनिंग वेक्टर का अर्थ:
एक क्लोनिंग वेक्टर को एक क्लोनिंग वाहन या वाहक डीएनए या बस एक वेक्टर या वाहन के रूप में कहा जा सकता है। क्लोनिंग वेक्टर डीएनए अणु है जिसमें क्लोनिंग के लिए लक्ष्य डीएनए पेश किया जाता है और जो मेजबान जीव में प्रतिकृति के लिए सक्षम है। ये वैक्टर प्लास्मिड, बैक्टीरियोफेज, कोस्मिड, वायरस आदि हो सकते हैं।
निबंध # 2. एक क्लोनिंग वेक्टर के लक्षण:
एक क्लोनिंग वेक्टर में कुछ महत्वपूर्ण विशेषताएं होनी चाहिए जो इस प्रकार हैं:
1. यह अपने परिचय के बाद मेजबान जीव में प्रतिकृति करने में सक्षम होना चाहिए ताकि अपने साथ लक्ष्य डीएनए की कई प्रतियों का उत्पादन किया जा सके।
2. इसे तैयार करना आसान होना चाहिए अर्थात इसे आसानी से अलग और शुद्ध किया जाना चाहिए।
3. यह आकार में छोटा होना चाहिए ताकि जीन क्लोनिंग के दौरान किसी भी कठिनाई से बचा जा सके।
4. इसमें मार्कर जीन (जैसे टेट आर, कान आर, इत्यादि) होने चाहिए जो अनियंत्रित लोगों से रूपांतरित कोशिकाओं के चयन में मदद करते हैं।
5. प्रतिबंध एंजाइमों के लिए एक अद्वितीय दरार स्थल मौजूद होना चाहिए।
6. एक वेक्टर में प्रमोटर, टर्मिनेटर, ऑपरेटर आदि जैसे विशिष्ट नियंत्रण प्रणाली होनी चाहिए ताकि क्लोन डीएनए ठीक से व्यक्त हो सके।
निबंध # 3. सेक्टरों के प्रकार:
विभिन्न वैक्टर हैं जो एक उपयुक्त मेजबान में वांछित डीएनए टुकड़े को क्लोन करने के लिए उपयोग किए जा सकते हैं। सदिश अणुओं की दो व्यापक श्रेणियों का उपयोग प्लास्मिड और बैक्टीरियोफेज के रूप में किया जा रहा है। हालांकि, कुछ अन्य प्रकार के वैक्टर भी विकसित किए गए हैं जैसे कि कॉस्मिड्स, फागमिड्स। संयंत्र वायरस, आदि
विभिन्न क्लोनिंग वैक्टर का संक्षिप्त विवरण नीचे दिया गया है:
(1) प्लास्मिड-वैक्टर:
प्लास्मिड जीवाणु कोशिकाओं में मौजूद अतिरिक्त क्रोमोसोमल डबल-फंसे, बंद और परिपत्र, आत्म-प्रतिकृति डीएनए अणु हैं। इनका आकार 1 kb से लेकर 200 kb से अधिक होता है। प्लास्मिड या तो स्वतंत्र रूप से मौजूद हो सकते हैं या बैक्टीरिया के गुणसूत्र में एकीकृत हो सकते हैं।
उन प्लास्मिड को जो बैक्टीरिया के गुणसूत्र में एकीकृत होते हैं, उन्हें एपिसोड कहा जाता है। कई मेजबान गुणों को नाइट्रोजन-निर्धारण, एंटीबायोटिक-प्रतिरोध, एंटीबायोटिक-उत्पादन, कोलिसिन-उत्पादन, आदि जैसे प्लास्मिड द्वारा सम्मानित किया जाता है।
बैक्टीरियल प्लास्मिड के कुछ सबसे व्यापक रूप से अध्ययन प्रकार हैं:
मैं। आर-प्लास्मिड: वे एंटीबायोटिक दवाओं के प्रतिरोध के लिए जीन ले जाते हैं।
ii। एफ-प्लास्मिड या प्रजनन कारक: संयुग्मन के लिए जिम्मेदार।
iii। कोल-प्लास्मिड्स: कोलिन्स (प्रोटीन जो संवेदनशील ई.कोली कोशिकाओं को मारता है) के लिए जीन ले जाता है।
iv। एग्रोबैक्टीरियम एसपीपी से टीआई-प्लास्मिड्स (ट्यूमर उत्प्रेरण) और री-प्लास्मिड्स (रूट उत्प्रेरण)।
सिंगल कॉपी और मल्टीपल कॉपी प्लास्मिड:
जब प्लास्मिड को प्रति जीवाणु कोशिका में केवल एक प्रति के रूप में बनाए रखा जाता है, तो उन्हें सिंगल कॉपी प्लास्मिड कहा जाता है। इसके विपरीत, बहु प्रति या मल्टी-कॉपी प्लास्मिड को आमतौर पर प्रति जीवाणु कोशिका (छवि 1) की 10-20 प्रतियों के रूप में बनाए रखा जाता है।
प्लास्मिड की आराम और स्ट्रिंग प्रतिकृति:
मल्टी-कॉपी प्लास्मिड आराम प्रतिकृति नियंत्रण के तहत दोहराते हैं जहां वे अपने मेजबान जीनोम (छवि 2) के प्रत्येक प्रतिकृति के लिए एक से अधिक प्रतिकृति से गुजरते हैं।
दूसरी ओर, एकल-कॉपी प्लास्मिड का प्रतिकृति नियंत्रण मेजबान जीनोम के समान है। इसका मतलब है, एकल-कॉपी प्लास्मिड्स अपने मेजबान जीनोम के प्रत्येक प्रतिकृति के लिए केवल एक प्रतिकृति से गुजरते हैं और इसे कड़े प्रतिकृति नियंत्रण के रूप में कहा जाता है।
एक क्लोनिंग वेक्टर के रूप में उपयोगी होने के लिए, प्लास्मिड को एक अच्छे वेक्टर के गुणों जैसे छोटे आकार, मार्कर जीन, अद्वितीय दरार साइटों को ले जाना चाहिए और इसे आराम से फैशन में दोहराने में सक्षम होना चाहिए।
जब प्लास्मिड्स को आराम से प्रतिकृति नियंत्रण के तहत दोहराया जाता है, तो वे बहुत बड़ी संख्या में प्रतियों में सेल में जमा हो जाते हैं, प्रति सेल या उससे अधिक 1000 प्रतियां हो सकती हैं। इस प्रकार, इस मामले में, उपज क्षमता बढ़ जाती है; इसलिए, ऐसे प्लास्मिड (यानी, मल्टी-कॉपी प्लास्मिड) का उपयोग क्लोनिंग वैक्टर के रूप में किया जाता है।
कुछ प्लास्मिड, प्रतिकृति की उत्पत्ति की विशिष्टता के कारण, होस्ट सेल की केवल एक प्रजाति में दोहरा सकते हैं। अन्य प्लास्मिडों में प्रतिकृति की विशिष्ट उत्पत्ति होती है और वे कई जीवाणु प्रजातियों में दोहरा सकते हैं। इन प्लास्मिड को क्रमशः संकीर्ण-होस्ट रेंज और ब्रॉड-होस्ट रेंज प्लास्मिड कहा जाता है।
स्वायत्त, आत्म-प्रतिकृति वाले आनुवंशिक तत्वों के रूप में, प्लास्मिड के पास संभावित क्लोनिंग वैक्टर बनाने के लिए मूल गुण हैं। हालांकि, स्वाभाविक रूप से होने वाली प्लास्मिड में कई महत्वपूर्ण विशेषताओं का अभाव हो सकता है जो उच्च गुणवत्ता वाले क्लोनिंग वेक्टर के लिए आवश्यक हैं।
इसलिए, किसी को जेनेटिक इंजीनियरिंग द्वारा प्राकृतिक प्लास्मिड को संशोधित करना पड़ सकता है ताकि उपयुक्त क्लोनिंग वैक्टर प्राप्त कर सकें जिन्हें संशोधित या इंजीनियर प्लास्मिड वैक्टर कहा जाता है।
इन संशोधनों को एंटीबायोटिक प्रतिरोध के लिए जीन को सम्मिलित करके या आराम से प्रतिकृति आदि के लिए प्लास्मिड में किया जा सकता है। कई ऐसे संशोधित प्लास्मिड प्राप्त किए गए हैं जो क्लोनिंग वैक्टर के रूप में चमत्कार कर रहे हैं।
पीबीआर 322:
यह आणविक क्लोनिंग के लिए बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया जाने वाला लोकप्रिय प्लास्मिड है। इसके नाम में, पी इसे एक प्लास्मिड के रूप में नामित करता है; BR शोधकर्ताओं एफ। बोलिवर और आर। रोड्रिगेज के नाम के लिए खड़ा है, जिन्होंने इस प्लास्मिड को बनाया था, जबकि 322 इस प्लास्मिड को इसके रचनाकारों द्वारा दिए गए संख्यात्मक पदनाम है जो इसे प्राकृतिक प्लास्मिड से प्रयोगशाला में इंजीनियर किया गया था ताकि यह क्लोनिंग के वांछनीय गुणों के अधिकारी हो। वेक्टर।
पीबीआर 322 की उपयोगी विशेषताओं में इसका छोटा आकार (~ 4.4 केबी) और दो एंटीबायोटिक प्रतिरोध जीनों की उपस्थिति में एम्पीसिलीन (एम्पी आर ) और टेट्रासाइक्लिन (टेट आर ) का प्रतिरोध शामिल है। PBR322 की एक और लाभप्रद विशेषता यह है कि यह ई। कोलाई में एक उच्च प्रतिलिपि संख्या पर बनाए रखा जाता है, हालांकि, इसमें डीएनए प्रतिकृति की उत्पत्ति होती है जो केवल ई। कोलाई में कार्य करता है और इसलिए इसे आसानी से अन्य बैक्टीरिया में स्थानांतरित नहीं किया जा सकता है।
pBR327:
यह pBR322 से निकला है ~ ~ 1 kb खंड को हटाने जैसे कुछ संशोधन करने के बाद। PBR322 के विपरीत, यह एक गैर-संयुग्मिक प्लास्मिड है और इसलिए यह अन्य E.coli कोशिकाओं को अपना स्थानांतरण निर्देशित नहीं करता है। यह pBR322 की तुलना में ई। कोलाई सेल की अधिक संख्या में प्रतियों (45 - 60) को बनाए रखा जा सकता है।
pUC8:
यह संशोधित प्लास्मिड वेक्टर pBR322 से लिया गया है। इसमें लाख Z जीन और एम्पीसिलीन प्रतिरोधी जीन (amp r ) होता है। इस प्लास्मिड को वेक्टर के रूप में उपयोग करने का एक बड़ा लाभ यह है कि पुनः संयोजक कोशिकाओं को एकल चरण प्रक्रिया में पहचाना जा सकता है। इसलिए, PUC8 के साथ क्लोनिंग प्रयोग PBR322 या pBR327 की तुलना में लगभग आधा समय लेता है।
PUC19:
यह pBR322 से विकसित किया गया है। इसका आकार ~ 2.7 kb है। इसमें एक एम्पीसिलीन प्रतिरोधी जीन (amp r ), लाख Z 'जीन, कई अद्वितीय क्लोनिंग साइटें) और pBR322 से प्रतिकृति की उत्पत्ति शामिल है।
(२) जीवाणुभक्षी क्षेत्र:
बैक्टीरियोफेज बैक्टीरिया को संक्रमित करने वाले वायरस हैं। इन्हें सामान्यतः चरणों के रूप में जाना जाता है। बैक्टीरियोफेज बैक्टीरिया कोशिकाओं पर हमला करते हैं और उन में आनुवंशिक सामग्री (डीएनए या आरएनए) को इंजेक्ट करते हैं, जिसे बाद में बैक्टीरिया के अंदर दोहराया और व्यक्त किया जाता है। दो बैक्टीरियोफेज जो संशोधित किए गए हैं और आमतौर पर क्लोनिंग वैक्टर के रूप में उपयोग किए जाते हैं वे फेज-ओआईएन और फेज-एम 13 हैं।
फेज लंबा (λ) वेक्टर:
इसमें ~ 48 kb डीएनए होता है जो रैखिक होता है और 12 न्यूक्लियोटाइड्स के एकल फंसे हुए पूरक छोरों के साथ दोहरा होता है (जिसे कोएक्टिव छोर कहा जाता है)। फेज- λ। जीनोम में एक बड़ा गैर-आवश्यक क्षेत्र होता है जो सेल लिम्फ के लिए महत्वपूर्ण नहीं है इस λ-जीनोम में, विदेशी डीएनए डाला जा सकता है या फेज डीएनए को विदेशी डीएनए द्वारा प्रतिस्थापित किया जा सकता है।
संक्रमण के बाद, विदेशी डीएनए के साथ यह रैखिक λ जीन बैक्टीरियल सेल में प्रवेश करता है। बैक्टीरियल सेल के अंदर, यह λ -gen कोइजेसिव छोरों के युग्मन द्वारा प्रसारित होता है। इस तरह के मोहरबंद चिपकने वाले छोरों को अब कॉस-साइट्स (छवि 4) कहा जाता है। अब, फेज या तो लिटिक या लाइसोजेनिक चरण को अपना सकता है और इसकी कई प्रतियाँ बनाता है।
फेज M13 वेक्टर:
यह ई। कोलाई का एक बहुत छोटा फेज है जो केवल सेक्स-पाइलस के माध्यम से संक्रमित करता है। इसका डीएनए गोलाकार है, सिंगल फंसा हुआ है और है - 10 केबी लंबा। ई। कोलाई सेल में प्रवेश करने के बाद, यह एकल फंसे हुए डीएनए अपने मानार्थ स्ट्रैंड को संश्लेषित करता है और इस प्रकार डबल-स्ट्रैंड हो जाता है जो एक मध्यवर्ती रूप होता है जिसे प्रतिकृति फॉर्म (RF) के रूप में जाना जाता है।
इस RF में, मूल स्ट्रैंड को '+' के रूप में दिखाया जाता है और नए स्ट्रैंड को स्ट्रैंड के रूप में दिखाया जाता है। केवल '+' स्ट्रैंड को नए फेज कोट में पैक किया गया है। फेज M13 का यह RF एक प्लास्मिड की तरह कार्य करता है और इसका उपयोग क्लोनिंग (चित्र 5) के लिए वेक्टर के रूप में किया जाता है।
(3) कॉस्मिड क्षेत्र:
कॉस्मिड एक क्लोनिंग वेक्टर है जिसमें एक प्लास्मिड में फेज-एक्स की लागत साइट शामिल होती है। कॉस्मिड शब्द की उत्पत्ति 'कॉस' और 'प्लास्मिड' से हुई है । वायरम प्रोटीन को कूटने वाले जीन में कोस्मिड की कमी होती है। ये आम तौर पर लंबाई में 45 केबी तक डीएनए के टुकड़े के क्लोनिंग के लिए उपयोग किया जाता है।
विशिष्ट ब्रह्मांडों में निम्नलिखित विशेषताएं हैं:
ए। प्रतिकृति की उत्पत्ति
ख। अद्वितीय प्रतिबंध स्थल
सी। प्लास्मिड से एक मार्कर जीन।
घ। लगभग 12 ठिकानों वाला एक 'कोस' ।
ई। आकार छोटा है।
कोस्मिड में मौजूद कॉस-साइट जीनोम को सर्कुलेशन और लाइगेशन के लिए मदद करता है। कॉस्मिड वैक्टर के उदाहरण हैं c2XB, sCos सीरीज़, आदि (चित्र। 6)।
(4) फग्मिड वेक्टर:
एक फागीमिड को एक डबल-फंसे हुए प्लास्मिड वेक्टर के रूप में वर्णित किया जाता है, जिसमें प्लास्मिड के अलावा एक फिलामेंटस फेज से प्रतिकृति की उत्पत्ति होती है। इसका उपयोग एक क्लोन जीन के एकल फंसे हुए संस्करण को संश्लेषित करने के लिए किया जा सकता है।
फेग्मिड वेक्टर का एक उदाहरण pBlueScriptllKS (+/-) (चित्र 7) है। यह एक फग्मिड वेक्टर है जो ~ 2960 बीपी लंबी व्युत्पन्न pUC19 है। इसके नाम के अक्षर केएस दर्शाते हैं कि लैकज जीन का प्रतिलेखन प्रतिबंध स्थल केपीएनएल से सैकल की ओर बढ़ता है।
PBlueScript HKS (+/-) वेक्टर में मौजूद महत्वपूर्ण विशेषताएं हैं:
1. फेज f1 से प्रतिकृति की उत्पत्ति।
2. एक लैल प्रमोटर जो लाख जेड जीन के साथ पूरक है।
3. मल्टीपल क्लोनिंग साइट्स (MCS) फेज T3 और T7 प्रमोटर सीक्वेंस द्वारा दो स्ट्रैंड पर विपरीत दिशाओं में फ्लैंक किया गया।
4. एम्पीसिलीन रेसिस्टेंस जीन (ampr) भी मौजूद है।
5. एक प्लाज्मिड से प्रतिकृति ColEl ori की उत्पत्ति।
(५) कृत्रिम गुणसूत्र क्षेत्र:
कृत्रिम गुणसूत्र वास्तव में छोटे और अच्छी तरह से परिभाषित डीएनए अनुक्रम होते हैं जो कि पुनः संयोजक गुणसूत्र के रूप में निर्मित होते हैं। इन कृत्रिम गुणसूत्रों का इस्तेमाल डीएनए के बहुत बड़े खंडित टुकड़ों को ले जाने के लिए वैक्टर के रूप में किया जा सकता है।
विभिन्न प्रकार के कृत्रिम गुणसूत्र वैक्टर हैं:
YAC:
खमीर कृत्रिम गुणसूत्र। YAC एक रैखिक वेक्टर है जो खमीर गुणसूत्र की तरह व्यवहार करता है।
एक विशिष्ट YAC में निम्न शामिल हैं:
(ए) एक सेंट्रोमेरिक तत्व (CEN)
(बी) एक स्वायत्त रूप से प्रतिकृति अनुक्रम (एआरएस) यानी, खमीर के लिए प्रतिकृति की उत्पत्ति।
(ग) दो टेलोमेरिक क्रम (TEL)
(d) खमीर के लिए चयन योग्य मार्कर जीन।
YAC का एक सामान्य उदाहरण pYAC3 है और इसका संगठन दिए गए अंजीर में दिखाया गया है। 8।
बीएसी का उपयोग वाईएसी क्लोनिंग वेक्टर के विकल्प के रूप में किया जाता है। ये E.coli में बड़ी एकल प्रति के रूप में बनाए रखा जाता है। इनका निर्माण E.coli में मौजूद F- फैक्टर (फर्टिलिटी फैक्टर) का उपयोग करके किया जाता है। BAC डीएनए के बड़े (~ 50kb या अधिक) अनुक्रमों के क्लोनिंग के लिए उपयुक्त हैं। BAC वैक्टर के उदाहरण pBAC108L, pBeloBACl11, आदि हैं।
अन्य प्रकार के कृत्रिम गुणसूत्र हैं:
मैक: स्तनधारी कृत्रिम क्रोमोसोम
एचएसी: मानव कृत्रिम गुणसूत्र।
(6) संयंत्र वायरस आधारित वेक्टर:
प्लांट वायरस संक्रमण का कारण बनते हैं, जिसके परिणामस्वरूप उनके जीनों को मेजबान कोशिकाओं में पेश किया जाता है। वायरल डीएनए से जुड़े डीएनए सम्मिलित को भी मेजबान कोशिकाओं में पहुंचाया जा सकता है और इस प्रकार पादप विषाणु क्लोनिंग वैक्टर के रूप में भी कार्य करते हैं। ऐसे पादप-विषाणु के कुछ उदाहरण हैं क्यूलोमीवायरस, जेमिनी वायरस, टोबामोवायरस इत्यादि।
(7) पशु वायरस आधारित क्षेत्र:
प्रकृति में कई वायरस हैं जो जानवरों में बीमारियों का कारण बनते हैं। पशु वायरस पर आधारित क्लोनिंग वैक्टर को डिजाइन करने के लिए जानवरों के वायरस को उनकी आनुवंशिक सामग्री को मेजबान सेल में इंजेक्ट करने की क्षमता का दोहन किया जाता है। उदाहरण एडेनोवायरस, रेट्रोवायरस, बैकोलोवायरस आदि हैं।
(8) शटल क्षेत्र:
ये वैक्टर पुनः संयोजक तकनीकों द्वारा बनाए गए हैं। उनके पास एक से अधिक जीवों की कोशिकाओं में दोहराने की क्षमता है। वे यूकेरियोटिक और प्रोकैरियोटिक कोशिकाओं दोनों में मौजूद हो सकते हैं। उनके पास प्रतिकृति के दो मूल हैं, प्रत्येक मेजबान जीव के लिए एक विशिष्ट।
शटल वैक्टर के महत्वपूर्ण गुण नीचे दिए गए हैं:
ए। यह कई जीवों में प्रतिकृति बनाने में सक्षम है।
ख। यह आकार में छोटा होता है।
सी। वेक्टर की आसान पहचान के लिए चुनिंदा मार्कर इसमें मौजूद हैं।
घ। यह स्थिर है।
ई। यह गैर-रोगजनक है।
शटल वैक्टर का एक महत्वपूर्ण उदाहरण YEp (यीस्ट एपिसोमल प्लास्मिड) है जो इकोली और खमीर में दोहरा सकता है।
(9) ट्रांसपोज़न या ट्रांसपोज़र तत्वों का उपयोग क्लोनिंग वैक्टर के रूप में भी किया जा सकता है।
अभिव्यक्ति वेक्टर:
यह एक वेक्टर है जिसे इस तरह से डिज़ाइन किया गया है कि वेक्टर के साथ एकीकृत डीएनए सम्मिलित को मेजबान जीव में व्यक्त किया जाता है। सरल क्लोनिंग वैक्टर केवल मेजबान कोशिका में विदेशी जीन को शामिल करने के परिणामस्वरूप होते हैं। लेकिन, जब इस विदेशी जीन द्वारा एन्कोड किए गए पुनः संयोजक प्रोटीन के उत्पादन को प्राप्त करने की बात आती है, तो इस क्लोन वेक्टर को संशोधन की आवश्यकता होती है जो कुछ विशेष अनुक्रमों को सम्मिलित करके किया जाता है।
ऐसी संशोधित क्लोनिंग वेक्टर जो मेजबान कोशिकाओं में विदेशी जीन (या डीएनए डालने) की अभिव्यक्ति के लिए डिज़ाइन की गई है, एक्सप्रेशन वेक्टर कहलाती है।
यहां पता होना चाहिए कि इस तरह के संशोधन के लिए उपयोग किए जाने वाले विशेष अनुक्रम प्रमोटर अनुक्रम हैं (प्रतिलेखन शुरू करने के लिए संकेत प्रदान करता है) और टर्मिनेटर अनुक्रम (प्रतिलेखन समाप्त करने के लिए संकेत प्रदान करता है)। सरल शब्दों में, अभिव्यक्ति वैक्टर वे क्लोनिंग वैक्टर हैं जिनमें प्रोटीन संश्लेषण के लिए संकेत भी होते हैं।
निबंध # 4. डीएनए लाइब्रेरी:
इसे जीन लाइब्रेरी भी कहा जा सकता है। जैसा कि 'लाइब्रेरी' शब्द दर्शाता है; डीएनए लाइब्रेरी एक जीव से अलग डीएनए अनुक्रम ले जाने वाले क्लोन का संग्रह है। तो, एक डीएनए लाइब्रेरी कई डीएनए अनुक्रमों का एक मिश्रण है जिसे वेक्टर में क्लोन किया गया है एक डीएनए पुस्तकालय एक जीव के एक या एक से अधिक संबंधित जीन को अलग करने और विभिन्न जीनों के टोर भंडारण और विश्लेषण के लिए भी फायदेमंद है।
डीएनए के स्रोत के आधार पर, डीएनए पुस्तकालय दो प्रकार के होते हैं:
(i) जीनोमिक लाइब्रेरी
(ii) सीडीएनए पुस्तकालय।
जीनोमिक लाइब्रेरी:
यह डीएनए के क्लोन का संग्रह है जो किसी जीव के जीनोम से सीधे प्राप्त होता है। एक जीनोमिक लाइब्रेरी एक जीव के पूर्ण जीनोम का प्रतिनिधित्व करती है।
जीनोमिक लाइब्रेरी के निर्माण के चरण हैं (चित्र 9):
(ए) संपूर्ण जीनोमिक डीएनए को जीव से निकाला जाता है और शुद्ध किया जाता है।
(b) यह शुद्ध डीएनए तब क्लोनिंग के लिए उपयुक्त आकार के टुकड़ों में टूट जाता है। डीएनए का विखंडन या तो प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिज़ एंजाइम का उपयोग करके किया जा सकता है या भौतिक तरीकों जैसे कि बाल काटना या अल्ट्रासोनिक तरंगें, आदि।
(c) सुगंध को पुनः संयोजक डीएनए अणुओं को प्राप्त करने के लिए क्लोनिंग वैक्टर में डाला जाता है। प्रत्येक वेक्टर में डीएनए के अलग-अलग टुकड़े होते हैं।
(d) रिक डीएनए अणुओं की इस आबादी को क्लोनिंग के लिए होस्ट सेल में स्थानांतरित किया जाता है।
(on) इस तरह से क्लोन किए गए ऐसे अंशों के संग्रह को जीनोमिक लाइब्रेरी कहा जाता है। बड़े जीनोम वाले जीवों के लिए जीनोमिक लाइब्रेरी का निर्माण एक्स-फेज या वाईएसी, बीएसी आदि जैसे कृत्रिम क्रोमोसोम वैक्टर के साथ किया जाता है, जबकि बैक्टीरिया जैसे छोटे जीनोम वाले जीवों के लिए जीनोमिक लाइब्रेरी के निर्माण के लिए प्लास्मिड वैक्टर का इस्तेमाल किया जाता है।
निबंध # 5. सीडीएनए लाइब्रेरी:
सीडीएनए पूरक डीएनए के लिए खड़ा है। एंजाइम रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस के उपयोग से mRNAs से एक सीडीएनए लाइब्रेरी तैयार की जाती है।
सीडीएनए पुस्तकालय के निर्माण के चरण हैं (चित्र 10):
(ए) mRNAs सक्रिय ऊतकों से अलग होते हैं जो प्रोटीन को संश्लेषित करते हैं।
(बी) एक उपयुक्त ओलिगोन्यूक्लियोटाइड प्राइमर को mRNA के 3 ′ छोर में जोड़ा जाता है।
(c) रिवर्स ट्रांस्क्रिप्टेज़ एंजाइम प्राइमर का विस्तार करता है और एक पूरक डीएनए स्ट्रैंड बनाता है।
(d) नतीजतन, एक आरएनए-डीएनए हाइब्रिड प्राप्त होता है जिसमें से आरएनए को क्षारीय हाइड्रोलिसिस या आरएनएएस एंजाइम द्वारा हटा दिया जाता है।
(ई) अब, केवल एक सीडीएनए स्ट्रैंड है जो प्राइमर के रूप में अपने 3 a अंत का उपयोग करके अपने स्वयं के पूरक स्ट्रैंड को संश्लेषित करता है।
(f) एक हेयर-पिन लूप बनता है जो एक विशिष्ट एंजाइम द्वारा पचता है जिसके परिणामस्वरूप डीएनए डुप्लेक्स बनता है।
(छ) विभिन्न mRNA टेम्पलेट्स का उपयोग करके कई ऐसे डीएनए द्वैध उत्पन्न किए जाते हैं और एक सीडीएनए पुस्तकालय के रूप में एकत्र किए जाते हैं।