कार्बन के स्रोत के रूप में साइट्रेट का उपयोग करने के लिए एक बैक्टीरिया की क्षमता की जांच करने के लिए साइट्रेट यूटिलाइजेशन टेस्ट

कार्बन के एकमात्र स्रोत के रूप में साइट्रेट का उपयोग करने के लिए बैक्टीरिया की क्षमता का पता लगाने के लिए साइट्रेट उपयोग परीक्षण करने का लक्ष्य।

सिद्धांत:

कुछ बैक्टीरिया कार्बनिक सी और एन के बिना मीडिया में बढ़ने की क्षमता रखते हैं।

वे सोडियम साइट्रेट को सी के एकमात्र स्रोत के रूप में और अमोनियम डाइहाइड्रोजेन फॉस्फेट (NH ₄ H ₂ P0 ₄ ) को N के एकमात्र स्रोत के रूप में उपयोग कर सकते हैं। वे NH _{3 के} उत्पादन के साथ N प्राप्त करने के लिए NH ₄ H ₂ P0 ₄ का उपयोग करते हैं, जो बढ़ता है pH हरा (pH = 6.9) से हरा (नीला = 7.6 से ऊपर पीएच) से ब्रोमोथाइमॉल के रंग में परिवर्तन होता है।

साइट्रेट उपयोग परीक्षण में, सोडियम बैटरेट, NH ₄ H ₂ P0 ₄ और ब्रोमोथाइमॉल नीले रंग के बिना कार्बनिक सी या एन युक्त अगर स्लाटरों पर टेस्ट बैक्टीरिया को उगाया जाता है। यदि बैक्टीरिया में सी के एकमात्र स्रोत के रूप में साइट्रेट का उपयोग करने की क्षमता है, तो यह तिरछा पर विकास को दर्शाता है। यह NH ₄ H ₂ P0 ₄ का उपयोग N के एकमात्र स्रोत के रूप में करता है, जिसके परिणामस्वरूप हरे से नीले रंग में तिरछे रंग में परिवर्तन होता है।

सामग्री की आवश्यकता:

टेस्ट ट्यूब, शंक्वाकार फ्लास्क, कॉटन प्लग, टीका सुई, आटोक्लेव, बन्सन बर्नर, लैमिनर फ्लो चैंबर, डिस्पोजल जार, इनक्यूबेटर, सीमन्स सिट्रेट अगर, पृथक कालोनियों या बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों।

प्रक्रिया:

1. सीमन्स सिट्रेट एगर माध्यम की सामग्री (सोडियम साइट्रेट, एनएच ₄ एच, पी ₄ और मुख्य सामग्री के रूप में ब्रोमोथाइमॉल ब्लू) या इसके तैयार किए गए पाउडर को 100 मिलीलीटर माध्यम के लिए आवश्यक तौला जाता है और आसुत के 100 मिलीलीटर में भंग कर दिया जाता है। एक 250 मिलीलीटर शंक्वाकार फ्लास्क में मिलाते हुए और घूमता हुआ पानी (चित्र। 7.6)।

2. इसका पीएच एक पीएच पेपर या पीएच मीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है और यदि यह कम है तो 0.1N HC1 का उपयोग करके 6.9 या समायोजित किया जाता है।

3. पूरी तरह से मध्यम में अगर को भंग करने के लिए फ्लास्क को गरम किया जाता है।

4. इससे पहले कि यह जम जाए, गर्म पिघली हुई स्थिति में माध्यम को 5 टेस्ट ट्यूब (लगभग 20 मिलीलीटर प्रत्येक) में वितरित किया जाता है।

5. परखनली सूती-प्लग वाली होती हैं, जिन्हें क्राफ्ट पेपर से ढका जाता है और धागे या रबर बैंड से बांधा जाता है।

6. वे आटोक्लेव में 15 मिनट के लिए 121 ° C (15 psi दबाव) पर निष्फल होते हैं।

7. नसबंदी के बाद, उन्हें आटोक्लेव से निकाल दिया जाता है और मध्यम और ठंडा करने के लिए एक तिरछी स्थिति में रखा जाता है, ताकि साइट्रेट अगर स्लांट प्राप्त हो सके।

8. परीक्षण बैक्टीरिया को असमान रूप से टीका लगाया जाता है, अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह कक्ष में, बट में चाकू मारकर और एक लौ- निष्फल सुई की मदद से तिरछी सतह पर टकराकर। प्रत्येक टीका के बाद सुई को निष्फल कर दिया जाता है।

9. एक इनक्यूबेटर में 24 से 48 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनोकेटेड तिरछा ऊष्मायन किया जाता है।