इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के तहत वस्तुओं के अवलोकन के लिए 7 तकनीकें

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के तहत वस्तुओं के अवलोकन के लिए अपनाई जाने वाली कुछ सबसे महत्वपूर्ण तकनीकें हैं: (1) छाया-ढलाई (2) नकारात्मक धुंधला (3) अति पतली धारा (4) फ्रीज-नक़्क़ाशी (5) सेल अभिकर्मकों का स्थानीयकरण (6) एंजाइमों का स्थानीयकरण (7) ऑटोरैडियोग्राफी।

(1) छाया-कास्टिंग:

छाया-कास्टिंग में, सूक्ष्म वस्तु को वैक्यूम जार के अंदर रखे विशेष ग्रिड में सुखाया जाता है।

धातु की एक अत्यंत पतली परत (जैसे प्लैटिनम) को तिरछे कोण पर अत्यधिक गर्म तंतु से वस्तु पर जमा किया जाता है, जिससे वस्तु एक तरफ से एक छाया उत्पन्न करती है।

छायांकित छवि की जांच वस्तु के आकार (वस्तु की सतह की स्थलाकृतिक विशेषताएं) के रूप में जानकारी प्रदान करती है, जिसे इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप को स्कैन करके देखा जा सकता है।

(2) नकारात्मक धुंधला:

इस तकनीक का पालन बहुत छोटी वस्तुओं, जैसे वायरस और बैक्टीरिया फ्लैगेला के मिनट विवरण का पालन करने के लिए किया जाता है। फॉस्फोटुंगस्टिक एसिड या उसके नमक की तरह एक इलेक्ट्रॉन-अपारदर्शी पदार्थ को वस्तु की सतह पर मोटी जमाव का एक कोट बनाने की अनुमति दी जाती है, इसमें प्रवेश किए बिना। जब इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के गन से इलेक्ट्रॉन इन लेपित सतहों से नहीं गुजर सकते हैं तो ये संरचनाएं स्पष्ट रूप से दिखाई देने लगती हैं।

(3) अति पतली धारा:

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के तहत इसकी आंतरिक ठीक संरचनाओं के दृश्य की अनुमति देने के लिए एक अखंड माइक्रोबियल सेल बहुत मोटी है। इंट्रासेल्युलर ठीक संरचनाओं के अवलोकन के लिए, सेल को प्लास्टिक सामग्री के एक ब्लॉक में एम्बेडेड किया जाता है और अल्ट्रा-पतली वर्गों (60 एनएम के रूप में पतले) में काट दिया जाता है।

सटीक संरचना की व्याख्या विभिन्न स्तरों पर और विभिन्न कोणों पर खंडित कई अल्ट्रा-पतली स्लाइसों को देखकर की जाती है। यूरेनियम और लैंथेनम लवण जैसे विशेष दागों के उपयोग से संरचनाओं के विपरीत सुधार संभव है।

(4) फ्रीज-नक़्क़ाशी:

किसी वस्तु के अल्ट्रा-पतले वर्गों को प्राप्त करने के लिए, इसे रासायनिक उपचारों द्वारा तय किया जाना चाहिए। इस तरह के रासायनिक उपचारों के परिणामस्वरूप कलाकृतियों का निर्माण होता है। इन कलाकृतियों को फ्रीज-नक़्क़ाशी द्वारा दूर किया जाता है। फ्रीज नक़्क़ाशी में, नमूना एक ब्लॉक के अंदर जमे हुए है और खंडित है, जबकि अभी भी जमे हुए स्थिति में इसके अंदर निहित है।

(5) सेल कांस्टीट्यूएंसी का स्थानीयकरण:

यह कोशिकाओं के रासायनिक घटकों का पता लगाने के लिए एक विशेष तकनीक है। उदाहरण के लिए, एक सेल में एक एंटीजन का पता लगाने के लिए, सेल के एक अल्ट्रा-पतली अनुभाग को फेरिटिन-लेबल वाले एंटीबॉडी के साथ इलाज किया जाता है, जो एंटीजन को फेरिटिन-लेबल एंटीबॉडी-एंटीजन कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए बांधता है।

चूंकि फेरिटिन उच्च घनत्व का एक लोहा युक्त पदार्थ है, इसलिए एंटीबॉडी-एंटीजन कॉम्प्लेक्स स्पष्ट रूप से एक इलेक्ट्रॉन बीम के पारित होने को प्रभावित करता है, जिससे एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के तहत स्पष्ट अवलोकन के लिए एक उच्च विपरीत उत्पादन होता है।

(6) एंजाइमों का स्थानीयकरण:

इस तकनीक का उपयोग कोशिकाओं के भीतर एंजाइमों की स्थिति का पता लगाने के लिए किया जाता है। उदाहरण के लिए, एंजाइम आइसोसिट्रेट डिहाइड्रोजनेज का पता लगाने में, बैक्टीरिया कोशिकाओं के अति-पतले वर्गों को तैयार किया जाता है। फिर, कोलाइडयन सोने को विशेष रूप से एंजाइम से चिपका दिया जाता है, एक इम्यूनोकेमिकल तकनीक का पालन करते हुए। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के तहत कोलाइडयन स्वर्ण-निर्धारित एंजाइम देखा जा सकता है।

(Adi) आत्मकथा:

यह एक साइटोकेमिकल तकनीक है, जिसमें किसी ऑब्जेक्ट में किसी विशेष रासायनिक घटक का स्थान साइट को देखते हुए निर्धारित किया जाता है, जिस पर एक रेडियोधर्मी पदार्थ तैनात हो जाता है। वस्तु को सबसे पहले रेडियोधर्मी पदार्थ के संपर्क में आने से उसके उत्थान की अनुमति मिलती है।

फिर, इसे फोटोग्राफिक इमल्शन की एक परत के साथ कवर किया जाता है और कुछ घंटों के लिए अंधेरे में रखा जाता है। पदार्थ के क्षय के दौरान उत्सर्जित आयनकारी विकिरण पायस में अव्यक्त छवियों का निर्माण करता है। फोटोग्राफिक प्रसंस्करण के बाद, तैयार छवियों को इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के तहत तैयारी में चांदी के अनाज के रूप में देखा जाता है।